甲基化抑制劑對(duì)白血病細(xì)胞中SHP-1、JAK3、TYK2基因表達(dá)的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:研究甲基化抑制劑對(duì)JAK-STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中JAK家族成員JAK3、TYK2和造血細(xì)胞磷酸酶SHP-1在白血病細(xì)胞株中的表達(dá)情況的影響,并探討它們?cè)诎籽“l(fā)病中的作用。 方法:本試驗(yàn)研究對(duì)象為慢性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞株K562和白血病細(xì)胞株U937。將細(xì)胞懸浮培養(yǎng)于含10%熱滅活(56℃,30min)的小牛血清RPM11640培養(yǎng)基中。取對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)板,每孔1×106/ml細(xì)胞。5-aza-CdR濃度為0.5、

2、1、2μmol/1(共3孔),As2O3的濃度為1、2.5、5μmol/l(共3孔),As2O3 1μmol/l+5-aza-CdR 0.5μmol/1、As2O32.5μmol/l+5-aza-CdR 1μmol/l、As2O3 5μmol/l+5-aza-CdR2μmol/l(各1孔),不加藥物1孔。10種不同處理的細(xì)胞均各設(shè)2個(gè)復(fù)孔。細(xì)胞和藥物在37℃、5%CO2條件下孵育24h、48h、72h后收獲并洗滌,Trizol提取細(xì)胞總

3、RNA,熒光實(shí)時(shí)定量PCR(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction,RQ-PCR)檢測(cè)JAK3、TYK2及SHP-1的表達(dá)。 結(jié)果:1 SHP-1 mRNA在K562細(xì)胞中的表達(dá):As2O3和5-aza-CdR單獨(dú)作用及兩藥合用時(shí),呈劑量及時(shí)間依賴性,其表達(dá)逐漸升高,有顯著差異,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。2 JAK3 mRNA在K562細(xì)胞中的表達(dá):As2O3和5-

4、aza-CdR單獨(dú)作用及兩藥合用時(shí),呈劑量及時(shí)間依賴性,其表達(dá)逐漸降低,有顯著差異,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。3 TYK2 mRNA在K562細(xì)胞中的表達(dá):As2O3和5-aza-CdR單獨(dú)作用及兩藥合用時(shí),呈劑量及時(shí)間依賴性,其表達(dá)逐漸降低,有顯著差異,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。4 SHP-1mRNA在U937細(xì)胞中的表達(dá):As2O3和5-aza-CdR單獨(dú)作用及兩藥合用時(shí),呈劑量及時(shí)間依賴性,其表達(dá)逐漸升高,有顯著差異,

5、均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。5 JAK3 mRNA在U937細(xì)胞中的表達(dá):As2O3和5-aza-CdR單獨(dú)作用及兩藥合用時(shí),呈劑量及時(shí)間依賴性,其表達(dá)逐漸降低,有顯著差異,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。6 TYK2 mRNA在U937細(xì)胞中的表達(dá):As2O3和5-aza-CdR單獨(dú)作用及兩藥合用時(shí),呈劑量及時(shí)間依賴性,其表達(dá)逐漸降低,有顯著差異,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。7 SlIP-1、JAK3、TYK2三者之間相關(guān)性:

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