白血病細(xì)胞SHP-1與SOCS3基因表達(dá)的相關(guān)性研究及甲基化抑制劑對(duì)SHP-1基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：過(guò)去一直認(rèn)為許多腫瘤的形成主要是基因突變引起的，但20年后只發(fā)現(xiàn)癌基因K-ras和抑癌基因p53在許多不同類型的腫瘤中存在較高頻率的突變?，F(xiàn)在已發(fā)現(xiàn)越來(lái)越多基因的失活可能與甲基化有關(guān)。DNA甲基化能夠抑制多種惡性血液病抑癌基因的表達(dá)，是惡性血液病發(fā)病的機(jī)制之一，并與預(yù)后密切相關(guān)。當(dāng)抑癌基因正常時(shí)起抑制細(xì)胞增殖和腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移的作用，參與細(xì)胞粘附與信號(hào)傳導(dǎo)以及DNA損傷的修復(fù)等。如果抑癌基因突變或缺失失去活性，其功能削弱，細(xì)胞就會(huì)在

2、無(wú)控制狀態(tài)下反復(fù)復(fù)制，最終形成腫瘤并發(fā)生轉(zhuǎn)移。近年來(lái)，新的抑癌基因不斷被發(fā)現(xiàn)，SHP-1酪氨酸磷酸酶是其中之一，它在造血細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中發(fā)揮負(fù)調(diào)節(jié)作用，SHP-1表達(dá)的減少和缺失對(duì)腫瘤的發(fā)生起關(guān)鍵性作用。以往的研究證明啟動(dòng)子區(qū)的高甲基化導(dǎo)致抑癌基因失活是人類腫瘤所具有的共同特征之一，而且這種高甲基化是導(dǎo)致抑癌基因失活的又一個(gè)機(jī)制。與基因改變不同，遺傳外改變是可逆的。恢復(fù)啟動(dòng)子甲基化所引起失活關(guān)鍵基因的表達(dá)有助于逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的表型。目前去甲

3、基化治療已成為一種誘導(dǎo)分化和抑制增殖的新方法，對(duì)AML、MDS、CML療效肯定。本研究旨在探討SHP-1基因在急性白血病患者中的表達(dá)情況及其與預(yù)后的關(guān)系。同時(shí)進(jìn)一步了解甲基化抑制劑對(duì)白血病細(xì)胞中SHP-1表達(dá)的影響及SHP-1在白血病發(fā)病機(jī)制中的作用。為臨床上DNA甲基化在腫瘤早期診斷和預(yù)后分析中以及在腫瘤的預(yù)防和治療中可能具有的重要作用。 方法：本研究對(duì)象為75例急性白血病(AL)患者。初治患者49例，復(fù)發(fā)患者5例，緩解患者2

4、1例(其中追蹤觀察8例從初治到緩解的患者)。急性髓細(xì)胞白血病(AML)患者55例[M12例、M211例、M318例、M45例、M516例、M62例、骨髓增生異常綜合征(MDS)轉(zhuǎn)白1例]。急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)患者20例。骨髓增殖性疾病7例(MDS3例、真性紅細(xì)胞增多癥2例、原發(fā)性血小板增多癥2例)，慢性粒細(xì)胞白血病(CML)14例(包括10例慢性粒細(xì)胞白血病慢性期患者、4例慢性粒細(xì)胞白血病急變期患者)，23例正常人作為正常對(duì)照。

5、采用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法對(duì)AL患者、CML、MPD患者和23例正常對(duì)照的骨髓進(jìn)行SHP-1、SOCS3mRNA水平的監(jiān)測(cè)。通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)的方法對(duì)白血病細(xì)胞株K562、和淋巴瘤細(xì)胞株T2進(jìn)行傳代培養(yǎng)，并用不同濃度的甲基化抑制劑5雜氮-2脫氧-胞苷(5-aza-2’deoxycytidine，5-aza-CdR)和三氧化二砷(As2O3)對(duì)其進(jìn)行處理，用MTT法觀察細(xì)胞活性及生長(zhǎng)狀況，并繪制生長(zhǎng)曲線；同時(shí)用RT-PC

6、R方法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組SHP-1、c-kit基因的mRNA的表達(dá)水平。 結(jié)論： 1.SHP-1在初治AL患者低表達(dá)，緩解后表達(dá)升高，復(fù)發(fā)后再次降低?？紤]SHP-1的甲基化與它的低表達(dá)和缺失密切相關(guān)。SHP-1低表達(dá)的初治AL患者緩解率低，表明與白血病的療效預(yù)后有關(guān)，可用來(lái)作為判斷療效預(yù)后的指標(biāo)。而SOCS3陽(yáng)性組的緩解率高于陰性組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.5-aza-CdR和As2O3可增加K562和T2細(xì)胞株中