慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞STAT5與SHP2基因的表達(dá)及酪氨酸激制劑對其表達(dá)的影響.pdf

1、目的：慢性粒細(xì)胞白血病 (CML ) 具有特征性染色體異常，它是由t(9；22)(q34；q11)染色體易位形成的，被命名為Ph染色體。在分子水平形成BCR/ABL融合基因，該基因編碼的融合蛋白BCR/ABL具有強(qiáng)酪氨酸激酶活性，可以異常激活多條細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。如RAS/MFAPK，PI3K/AKT，C-Myc，JAK/STAT途徑等。其中，信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子5(STAT5)在CML細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中起重要作用。STAT活化后形成二聚

2、體，轉(zhuǎn)位至胞核，與DNA上的特定調(diào)節(jié)序列結(jié)合，調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄。SHP2屬于蛋白酪氨酸磷酸酶家族成員之一，是含有Src同源區(qū)2的胞質(zhì)PTP，是一種由PTPN11基因編碼的非受體依賴型酪氨酸蛋白磷酸酶，應(yīng)用基因敲除技術(shù)敲除小鼠胚胎干細(xì)胞SHP2基因后，引起包括紅系、粒系和淋巴系等多個造血細(xì)胞系統(tǒng)發(fā)育障礙，表明SHP2在正常造血細(xì)胞生長與發(fā)育過程中起著十分重要的作用。有研究表明，SHP2能作用于多條信號傳導(dǎo)通路的多個位點，另外SHP2也可以與多

3、種信號傳導(dǎo)中間媒介體相結(jié)合，如Grb2，JAK2，Gab1，Gab2等。Bcr/abl融合基因編碼的P210蛋白在造血細(xì)胞內(nèi)不僅能與Shp2結(jié)合，還能使其磷酸化。酪氨酸激酶抑制劑STI571 (格列為)已經(jīng)被作為特效的CML靶向治療藥物，但由于BCR/ABL突變，mRNA 轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)等原因而有耐藥現(xiàn)象產(chǎn)生，因此有必要尋找其它靶分子來作為聯(lián)合用藥的靶點。本研究旨在探討STAT5、SHP2基因在慢性粒細(xì)胞白血病患者中的表達(dá)情況，同時進(jìn)一步

4、了解酪氨酸激酶抑制劑對K562細(xì)胞的影響及STAT5在慢性粒細(xì)胞白血病發(fā)病機(jī)制中的作用，為慢性粒細(xì)胞白血病的聯(lián)合靶向治療提供新的依據(jù)。 方法：本研究對象為30例慢性粒細(xì)胞白血病(CML)患者。慢性期患者25例，加速急變期患者5例。10例正常人作為正常對照。采用半定量逆轉(zhuǎn)錄．聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法對患者和正常對照的骨髓進(jìn)行 BCR/ABL，STAT5A,STAT5B,SHP2mRNA水平的檢測。通過細(xì)胞培養(yǎng)的方法對白血

5、病細(xì)胞株K562進(jìn)行傳代培養(yǎng)，并用不同濃度的酪氨酸激酶抑制劑STI571對其進(jìn)行處理，用MTT法觀察細(xì)胞活性及生長狀況，并繪制生長曲線：用實時定量PCR檢測BCR/ABL mRNA水平，同時用RT-PCR方法檢測實驗組與對照組STAT5A，STAT5B，SHP2，MCL-1，BAX基因的mRNA的表達(dá)水平。 結(jié)論： 1.在CML患者原代白血病細(xì)胞中STAT5A，STAT5B，SHP2基因表達(dá)水平明顯高于正常對照組，說明