豬FoxO1和SOCS3基因的表達(dá)規(guī)律及白藜蘆醇對其表達(dá)調(diào)控的影響.pdf

1、本課題以1kg、20kg、40kg、60kg和90kg左右的杜長大豬為研究對象,通過體外細(xì)胞培養(yǎng)和飼養(yǎng)試驗(yàn),研究了豬FoxO1和SOCS3基因表達(dá)的組織特異性、不同生長階段的表達(dá)規(guī)律及其與脂肪沉積的關(guān)系,并探討了RES對豬前體脂肪細(xì)胞FoxO1和SOCS3基因表達(dá)調(diào)控的影響。取得的主要研究結(jié)果如下:
　　1.根據(jù)已報(bào)道的豬FoxO1、SOCS3和內(nèi)標(biāo)18S rRNA基因序列,克隆得到相應(yīng)的基因片段,與Genbank登陸的相應(yīng)片段(

2、登錄號分別為DQ243692、AY785556和AY265350)同源性分別為98％、100%和100%。以此為基礎(chǔ),構(gòu)建了適合于相應(yīng)基因序列的優(yōu)化半定量RT-PCR法,用于FoxO1和SOCS3基因表達(dá)的測定。
　　2.選取胎次相同的20kg左右的杜長大豬為試驗(yàn)對象,探討FoxO1和SOCS3基因在皮下脂肪、腹部脂肪、腸系膜脂肪、腦、心臟、肝臟、脾臟、腎臟、肌肉、十二指腸和胰臟中的表達(dá)差異。結(jié)果表明,豬FoxO1和SOCS3基因

3、在所檢測的組織中均有不同程度的表達(dá),其中,FoxO1基因在肝臟、腸脂和肌肉中的表達(dá)量較高,在腎臟、脾臟、心臟和胰臟中表達(dá)量次之,腦、皮脂、十二指腸和腹脂中表達(dá)量較低;SOCS3基因在心臟和脂肪組織中的表達(dá)量較高,腦和十二指腸中表達(dá)量較低。
　　3.選取胎次相同的1kg、20kg、40kg、60kg和90kg的杜長大豬各三頭屠宰,進(jìn)行胴體分割,測定脂肪率,并取皮下、腹部和腸系膜脂肪組織,探討豬FoxO1和SOCS3基因在不同生長階的

4、表達(dá)規(guī)律及其與體脂沉積的關(guān)系。結(jié)果表明:從1kg-90kg,杜長大豬脂肪率隨著體重的增加顯著增加(P＜0.01);FoxO1基因腸系膜脂肪組織中mRNA表達(dá)水平與脂肪率呈顯著正相關(guān)(r=0.837,P＜0.05);SOCS3基因在三種脂肪組織中的表達(dá)均隨體重增加而增加,且在皮下脂肪(r=0.882,P＜0.05)和腸系膜脂肪(r=0.976,P＜0.01)中mRNA表達(dá)水平與脂肪率均成顯著正相關(guān)。
　　4.分離培養(yǎng)7日齡杜長大仔豬

5、前體脂肪細(xì)胞,設(shè)空白對照組(完全培養(yǎng)基+0μmol/L RES)、RES1組(完全培養(yǎng)基+40μmol/L RES)、RES2組(完全培養(yǎng)基+80μmol/LRES)和RES3組(完全培養(yǎng)基+120μmol/L RES)四個(gè)處理組,研究RES對豬前體脂肪細(xì)胞增殖分化及FoxO1和SOCS3基因表達(dá)調(diào)控的影響。結(jié)果表明:RES能顯著抑制豬前體脂肪細(xì)胞增殖和分化,其中MTT法檢測細(xì)胞增殖結(jié)果顯示,RES處理24h后,RES1組、RES2組和

6、RES3組與對照組相比均顯著降低脂肪細(xì)胞數(shù)目,OD值分別下降22.30%(P＜0.05)、36.82%(P＜0.01)和42.50%(P＜0.01);油紅O染色法檢測細(xì)胞分化結(jié)果得出,RES處理24h后,與對照組相比,RES1組、RES2組和RES3組均明顯抑制脂肪細(xì)胞分化,OD值分別下降25.74%(P＜0.05)、60.78%(P＜0.01)和39.71%(P＜0.01)。RES也能明顯下調(diào)FoxO1基因在前體脂肪細(xì)胞中表達(dá),且與R

7、ES濃度呈劑量依賴關(guān)系,與對照組相比,RES處理24h后,RES2組和RES3組FoxO1基因表達(dá)量分別下降34.30%(P＜0.05)和42.47%(P＜0.01)。對前體脂肪細(xì)胞中SOCS3基因表達(dá)研究表明,RES對其表達(dá)具有上調(diào)作用,與對照組相比,RES處理24h和48后,RES2組SOCS3基因表達(dá)量分別增加32.53%(P＜0.05)和46.71%(P＜0.01)。
　　5.通過對豬FoxO1與SOCS3基因表達(dá)規(guī)律與脂