hepg2.2.15細(xì)胞脂肪變性對hbv基因表達及socs3和srebp1c通路的影響

1、山西醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文HepG2.2.15細(xì)胞脂肪變性對HBV基因表達及SOCS-3和SREBP-1c通路的影響姓名：王艷申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：內(nèi)科學(xué)（傳染病學(xué)）指導(dǎo)教師：趙龍鳳2011-03-20山西醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文IV第一部分 HepG2.2.15 細(xì)胞脂肪變性模型的建立。第二部分 HepG2.2.15 細(xì)胞脂肪變性對 HBVDNA 和蛋白表達的影響研究。第三部分 HBV 對脂肪變性 HepG2.2.15 細(xì)胞 SOCS-3

2、 及 SREBP-1c 通路的影響研究。第四部分 TGFβ1 對 HepG2.2.15 細(xì)胞脂肪變性的影響研究。第一部分 第一部分 第一部分 第一部分 HepG2.2.15 HepG2.2.15 HepG2.2.15 HepG2.2.15 細(xì)胞脂肪變性 細(xì)胞脂肪變性 細(xì)胞脂肪變性 細(xì)胞脂肪變性模型的建立 模型的建立 模型的建立 模型的建立實驗一 實驗一 實驗一 實驗一 HepG2 HepG2 HepG2 HepG2 及 及 及 及 He

3、pG2.2.15 HepG2.2.15 HepG2.2.15 HepG2.2.15 細(xì)胞的培養(yǎng)與觀察 細(xì)胞的培養(yǎng)與觀察 細(xì)胞的培養(yǎng)與觀察 細(xì)胞的培養(yǎng)與觀察目的 目的 建立 HepG2/HepG2.2.15 細(xì)胞凍存、復(fù)蘇和傳代的條件，了解細(xì)胞增殖特性及HBV 的復(fù)制和表達能力。方法 方法 采用無菌培養(yǎng)方法，細(xì)胞培養(yǎng)液中添加 G418，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長狀況，臺盼藍細(xì)胞的計數(shù)及活力鑒定，熒光實時定量 PCR 方法檢測細(xì)胞上清液中的 H

4、BV DNA，時間分辨熒光分析儀檢測 HBsAg 和 HBeAg。結(jié)果 結(jié)果 含 10% FBS 培養(yǎng)基可維持細(xì)胞的指數(shù)生長，含 70% FBS 的凍存液可保證細(xì)胞復(fù)蘇成活率達 90%，HepG2.2.15 細(xì)胞 HBVDNA、HBsAg 及 HBeAg 量隨培養(yǎng)時間延長而穩(wěn)步增長。結(jié)論 結(jié)論 HepG2/HepG2.2.15 生長快速，對培養(yǎng)基和凍存液血清濃度要求較高。定期向HepG2.2.15 細(xì)胞培養(yǎng)液中添加 G418 可保證 H

5、epG2.2.15 內(nèi) HBV 的穩(wěn)定復(fù)制和蛋白表達。實驗二 實驗二 實驗二 實驗二 HepG2 HepG2 HepG2 HepG2 及 及 及 及 HepG2.2.15 HepG2.2.15 HepG2.2.15 HepG2.2.15 細(xì)胞脂肪變性模型的構(gòu)建 細(xì)胞脂肪變性模型的構(gòu)建 細(xì)胞脂肪變性模型的構(gòu)建 細(xì)胞脂肪變性模型的構(gòu)建目的 目的 建立 HepG2/HepG2.2.15 細(xì)胞脂肪變性的實驗條件。方 法 方 法 選 擇 油 酸

6、（ OA ） 作 為 脂 肪 誘 導(dǎo) 劑 ， 設(shè) 定 0.1 ～ 0.4mM 濃 度 梯 度 對HepG2/HepG2.2.15 細(xì)胞進行脂變誘導(dǎo)。細(xì)胞分為對照組、二甲基亞砜（ DMSO，油酸溶劑）組和不同濃度 OA 組。MTT 法檢測細(xì)胞相對活性并制作細(xì)胞生長曲線，油紅 O-蘇木素染色觀察細(xì)胞內(nèi)脂滴情況并計算脂變率。結(jié)果 結(jié)果 生長曲線結(jié)果顯示，OA 濃度≤0.2mM 時細(xì)胞增殖活力不受影響，OA 濃度＞0.2mM 后隨 OA 濃度增

7、高細(xì)胞的增殖能力逐漸下降， 0.2%DMSO 不影響細(xì)胞的增殖。 油紅O 染色結(jié)果顯示， 在 0.2mM 濃度 OA 作用下 24h 時細(xì)胞內(nèi)開始出現(xiàn)橘紅色小脂滴， 隨作用時間的延長脂滴逐漸增多增大，72h 時形成明顯脂變。HepG2.2.15 細(xì)胞在 24h、48h 時的平均脂變率均低于 HepG2 細(xì)胞（P=0.028，0.022） ，72h 時無明顯差異（P=0.372） 。結(jié)論 結(jié)論 0.2mM 濃度的 OA 作用 72h 可使