TNF-α對肝細胞脂肪變性模型SCAP-SREBP-1c脂質合成通路的影響.pdf

1、目的：通過本研究探討TNF-α對肝細胞脂肪變性模型固醇調節(jié)元件結合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)及固醇調節(jié)元件結合蛋白-1c(SREBP-1c)表達的影響，探討TNF-α在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)SCAP-SREBP-1c脂質合成通路中的作用及可能機制。 方法： 1、建立油酸誘導的人肝細胞脂肪變性模型。 2、正常成人L-02肝細胞株，用含10％胎牛血清的1640培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)，分為對照組和模型組，正常培養(yǎng)基

2、培養(yǎng)的細胞為對照組(簡稱C組)，正常培養(yǎng)基加油酸誘導培養(yǎng)的細胞為模型組(簡稱F組)，另外兩組加入TNF-α(C組+TNF-α，簡稱C1組；F組+TNF-α，簡稱F1組)。TNF-α終濃度為200ng/mL。 3、油紅0染色光學顯微鏡觀察肝細胞脂滴積聚的情況。 4、RT-PCR法檢測各組SCAP、SREBP-1c、FASmRNA表達變化。 5、Westernblot法檢測各組SCAP、SREBP-1c蛋白表達變化。

3、 6、采用酶底物結合反應檢測肝細胞FAS活性變化。 7、檢測各組肝細胞內甘油三酯(TG)的含量。 結果： 1、成功地建立了油酸誘導的L-02肝細胞株脂肪變性模型。油紅0染色光學顯微鏡觀察對照組細胞內未見紅色脂滴。模型組在培養(yǎng)24小時后細胞內即可見少量脂肪變細胞，72小時可見細胞質內聚集了較多橘紅色的脂滴。電鏡觀察對照組細胞質內偶見脂滴出現。模型組肝細胞體積較大，較多脂滴存在于胞質中；核膜迂曲輪廓不清；細胞

4、內線粒體數量減少，基質腫脹，嵴稀疏。 2、油紅0染色光學顯微鏡觀察C組未見肝細胞脂肪變，細胞排列緊密，邊緣清晰，細胞核清晰可見。C1組可見少量脂肪變細胞，F組可見大量脂肪變細胞，F1組脂變細胞最多，細胞內脂滴數量明顯增多，部分融合成較大的脂滴，將細胞核推擠于一側。 3、各組肝細胞SCAP、SREBP-1c、FASmRNA表達的比較：C1、F、F1組較對照組增高(P＜0.01)，F1組增加最顯著。C1組與C組比較、F1組與

5、F組比較，差異有統計學意義(P＜0.01)。 4、SCAP、SREBP-1c蛋白的表達與mRNA表達變化規(guī)律一致。 5、FAS活性的比較：C1、F、F1組較C組增高(P＜0.01)，其中F1組最高。C1組與C組比較、F1組與F組比較差異有顯著意義(P＜0.01)，但F1組增加更明顯。 6、肝細胞內TG含量的比較：C1、F、F1組較C組增高(P＜0.01)，其中F1組最高。C1組與C組比較、F1組與F組比較差異有顯

6、著意義(P＜0.01)，但F1組增加更明顯，表明TNF-α對C組、F組均有作用，但對F組作用更明顯。 結論： 1、采用L-02肝細胞株可以成功制作培養(yǎng)的肝細胞脂肪變性模型。 2、TNF-α可上調正常L-02肝細胞及脂肪變性肝細胞SCAP、SREBP-1c、FAS的表達，促進肝細胞內TG的合成與蓄積。 3、TNF-α作用于正常肝細胞時，少數肝細胞也可發(fā)生脂肪變性，當作用于模型組時，發(fā)生脂肪變性的肝細胞數量較