版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、本文從以下幾方面進(jìn)行了詳細(xì)闡述。
第一部分小鼠原代肝細(xì)胞的分離與培養(yǎng)。
目的:肝臟是脂質(zhì)代謝的重要器官,建立小鼠原代肝細(xì)胞的體外培養(yǎng)技術(shù),用于后續(xù)脂代謝研究。
方法:采用Ⅳ型膠原酶原位二步灌流法分離小鼠原代肝細(xì)胞。用臺(tái)盼藍(lán)試劑對(duì)新鮮分離的細(xì)胞進(jìn)行染色以檢測(cè)細(xì)胞活率,并在不同時(shí)間點(diǎn)觀察細(xì)胞貼壁情況和培養(yǎng)基中白蛋白的分泌情況。通過對(duì)肝細(xì)胞白蛋白進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色和糖原染色,完成對(duì)肝細(xì)胞的鑒定。
結(jié)果
2、:臺(tái)盼藍(lán)結(jié)果顯示:本法所制得的小鼠原代肝細(xì)胞活率最高可達(dá)90%。剛分離的肝細(xì)胞大多數(shù)呈單個(gè)球形,具有一定立體感。4小時(shí)后肝細(xì)胞已基本貼壁,可見肝細(xì)胞的典型的雙核結(jié)構(gòu),胞質(zhì)呈扁平狀。1天后雙核更加明顯,核仁清晰可見,胞質(zhì)貼壁更加扁平,2天后細(xì)胞成多邊形,并維持此形態(tài)數(shù)天。免疫細(xì)胞化學(xué)染色和糖原染色顯示,所培養(yǎng)細(xì)胞基本均可合成白蛋白和糖原,并且一周以內(nèi)都可以在培養(yǎng)基中檢測(cè)到細(xì)胞分泌的白蛋白。
結(jié)論:小鼠原代肝細(xì)胞的分離與培養(yǎng)技術(shù)建
3、立成功,在一周內(nèi)具有較好的形態(tài)和功能,可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
第二部分炎癥因子對(duì)小鼠原代肝細(xì)胞脂質(zhì)積聚及損傷的影響。
目的:近年來的研究發(fā)現(xiàn),慢性系統(tǒng)性炎癥在代謝性疾病的發(fā)生和發(fā)展中有十分重要的作用。我們通過建立原代肝細(xì)胞分離與培養(yǎng)技術(shù),在體外模擬肝細(xì)胞正常生理狀態(tài),探討炎癥因子是否能造成小鼠原代肝細(xì)胞脂質(zhì)的聚集及損害。
方法:將培養(yǎng)的小鼠原代肝細(xì)胞分為以下6個(gè)組:Control組、軟脂酸組(PA)組、炎癥因子T
4、NF-α組和IL-6組、PA+TNF-α組和PA+IL-6組。定量檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)甘油三酯和游離脂肪酸水平及油紅O染色法來觀察各組細(xì)胞的脂質(zhì)沉積情況。熒光定量PCR法檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激指標(biāo)IRE1,ATF6,GRP78水平。通過測(cè)定過氧化氫以及活性氧水平來檢測(cè)細(xì)胞的氧化應(yīng)激狀態(tài)。
結(jié)果:給予炎癥因子TNF-α或IL-6炎癥刺激后,小鼠原代肝細(xì)胞的甘油三酯的含量出現(xiàn)了明顯升高;即使在高脂肪酸背景下,炎癥因子同樣也能刺激脂肪酸和甘油三酯的含
5、量。這與肝細(xì)胞的油紅O染色結(jié)果一致。進(jìn)一步檢測(cè)發(fā)現(xiàn),內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激指標(biāo)IRE1,ATF6,GRP78的基因表達(dá)水平以及氧化應(yīng)激指標(biāo)ROS和H2O2水平與脂肪酸和甘油三酯含量變化趨勢(shì)基本一致。
結(jié)論:炎癥因子可使脂質(zhì)在小鼠原代肝細(xì)胞內(nèi)異常積聚,進(jìn)而還可引起氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激而使肝細(xì)胞受損。
第三部分炎癥因子對(duì)SREBP-1及其下游靶基因表達(dá)的影響。
目的:SREBP-1是一種在肝臟中含量豐富的核轉(zhuǎn)錄因子,主要通
6、過調(diào)控下游靶基因ACCα和FAS的表達(dá),進(jìn)而調(diào)節(jié)脂肪酸的合成,影響肝臟內(nèi)甘油三酯的含量。本研究旨在探討炎癥因子對(duì)SREBP-1、ACCα和FAS表達(dá)的影響。
方法:按第二部分的方法對(duì)原代肝細(xì)胞進(jìn)行分組。采用熒光定量PCR法檢測(cè)炎癥因子對(duì)小鼠原代肝細(xì)胞中SREBP-1、ACCα和FAS基因水平變化,同時(shí)采用蛋白免疫印跡(Western Blotting)的方法觀察炎癥因子對(duì)小鼠原代細(xì)胞中SREBP-1、ACCα和FAS蛋白表達(dá)情
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 雛鴨原代肝細(xì)胞培養(yǎng)及DHAV-1致肝細(xì)胞損傷的研究.pdf
- FoxO1調(diào)控鵝原代肝細(xì)胞脂質(zhì)代謝作用研究.pdf
- 炎癥促進(jìn)四氯化碳誘導(dǎo)的小鼠脂肪變肝細(xì)胞脂質(zhì)異常集聚的分子機(jī)制.pdf
- 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通過SREBP-1c-FAS途徑影響肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積.pdf
- 炎癥干擾FAT-CD36表達(dá)并致腎臟脂質(zhì)異常積聚及損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- TNF-α對(duì)肝細(xì)胞脂肪變性模型SCAP-SREBP-1c脂質(zhì)合成通路的影響.pdf
- 原代大鼠肝細(xì)胞聚集體培養(yǎng)的研究.pdf
- Insig-1-SCAP-SREBP-1c通路對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激下肝細(xì)胞脂質(zhì)代謝的影響.pdf
- 原代小鼠肝細(xì)胞包埋培養(yǎng)工藝研究.pdf
- 原代小鼠肝細(xì)胞體外培養(yǎng)的研究.pdf
- pm2.5對(duì)致敏小鼠肺部炎癥細(xì)胞及因子的作用
- 脂多糖通過ERK1-2-PPARγ途徑上調(diào)adipophilin表達(dá)促進(jìn)巨噬細(xì)胞炎癥因子分泌.pdf
- 肝細(xì)胞高膽固醇負(fù)荷激活UPR介導(dǎo)炎癥因子表達(dá)上調(diào)的研究.pdf
- LXR激動(dòng)劑調(diào)節(jié)小鼠巨噬細(xì)胞脂質(zhì)內(nèi)穩(wěn)態(tài)及其炎癥因子分泌的實(shí)驗(yàn)研究.pdf
- hbvtg小鼠原代肝細(xì)胞培養(yǎng)及hbvhlaa2.1小鼠的初步應(yīng)用
- 肝螺桿菌CdtB毒素致小鼠肝細(xì)胞損傷的初步研究.pdf
- PRMT5 通過甲基化 SREBP1a 影響肝癌細(xì)胞脂質(zhì)代謝及增殖.pdf
- OXPAT對(duì)原代培養(yǎng)肝細(xì)胞脂滴形態(tài)的影響.pdf
- 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在肝損傷模型小鼠體內(nèi)向肝細(xì)胞分化.pdf
- 絲素蛋白載體的制備及原代小鼠肝細(xì)胞培養(yǎng)的研究.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論