肝螺桿菌CdtB毒素致小鼠肝細胞損傷的初步研究.pdf

1、肝螺桿菌是一種重要的人獸共患病病原，涉及慢性活動性肝炎、膽囊炎、盲腸炎、結(jié)腸炎、肝癌、膽石病、膽囊癌、乳腺癌等多種疾病，具有重要的公共衛(wèi)生意義。國際實驗動物組織及世界發(fā)達國家已將該類螺桿菌列為嚙齒類實驗動物必須排除的病原微生物;但我國對肝螺桿菌的危害和控制尚未引起高度關(guān)注，肝螺桿菌在我國嚙齒類實驗動物中保持著較高的感染率，其潛在威脅巨大。細胞致死性腫脹毒素(Cytolethal distending toxin，CDT)是目前革蘭氏陰性

2、桿菌在引起致病過程中唯一已知的毒力因子，已有研究表明，肝螺桿菌CdtB可引發(fā)細胞凋亡，但其是否引起肝細胞炎癥及引發(fā)肝細胞凋亡的作用機制尚未得到深入闡述。
　　本研究通過CdtB毒素處理小鼠原代肝細胞AML12，致力于探討肝螺桿菌細胞致死性腫脹毒素CdtB致小鼠肝損傷的作用機制。
　　首先，用不同濃度的CdtB處理AML12細胞，我們發(fā)現(xiàn)，隨著毒素濃度的增加，細胞出現(xiàn)生長停滯、皺縮和破裂的現(xiàn)象;CCK-8測定細胞活力發(fā)現(xiàn)，Cd

3、tB對AML12細胞增殖有抑制作用，且呈劑量-效應(yīng)關(guān)系;qRT-PCR檢測顯示，AML12細胞經(jīng)CdtB刺激后，IL-6、IL-1β、TNF-α、IFN-α1、IFN-γ的表達水平顯著上升，免疫印跡檢測結(jié)果表明，STAT3被磷酸化，進一步說明了CdtB可刺激AML12細胞釋放IL-6，經(jīng)JAK-STAT通路進一步刺激細胞產(chǎn)生細胞因子引起炎癥;同時，F(xiàn)ACS的檢測結(jié)果顯示，CdtB可誘導AML12細胞產(chǎn)生劑量依賴性的凋亡效應(yīng)。
　　

4、為探討CdtB致AML12細胞凋亡的作用機制，我們用Western-blot法檢測了Caspase、MAPK信號通路的相關(guān)蛋白，結(jié)果顯示，CdtB可以激活Caspase-9、Caspase-3、PARP、p38和Erk1/2 MAPK。以Caspase廣譜抑制劑Z-VAD-FMK和Erk1/2抑制劑U0126、p38抑制劑SB203580預(yù)處理細胞后，再經(jīng)CdtB處理，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，凋亡率、Caspase-3及PARP的裂解在經(jīng)Z-VAD-

5、FMK和SB203580處理后均顯著抑制，說明Caspase及p38 MAPK參與了CdtB引發(fā)的凋亡效應(yīng)。結(jié)合qRT-PCR結(jié)果，我們推測p38 MAPK通路在CdtB誘導的致AML12細胞炎性因子調(diào)控及凋亡中發(fā)揮著重要作用。
　　自噬作為一種重要的保護機制，廣泛存在于所有真核生物中。為進一步探討肝螺桿菌CdtB的作用機制，我們檢測了AML12細胞的自噬水平，結(jié)果發(fā)現(xiàn)AML12細胞本身處于較高的自噬水平，CdtB可激活PI3K/