2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、目的:通過小鼠肝部分切除術(shù)建立小鼠急性肝損傷的動(dòng)物模型,觀察不同時(shí)間點(diǎn)肝損傷及肝再生的變化,探討白介素-6(IL-6)在小鼠急性肝損傷后肝再生過程中可能的作用。
   實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)方法:SPF級(jí)健康雄性6-8周齡C57b1/j6小鼠及SPF級(jí)健康雄性IL-6基因敲除C57b/j6小鼠(均購于南京大學(xué)模式動(dòng)物研究所)體重18-28g,飼養(yǎng)于東南大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,自由飲水,隨意進(jìn)食,12小時(shí)交替照明。將小鼠分為對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組(IL

2、-6基因敲除小鼠),取5只小鼠作為空白對(duì)照組用以測(cè)量小鼠正常肝重/體重比、各肝葉所占比例及小鼠血清ALT、AST、GGT、AKP、Glu正常值范圍,對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組每組小鼠25只,每組小鼠分為6h,12h,24h,36h及48h5個(gè)時(shí)間點(diǎn),每個(gè)時(shí)間點(diǎn)5只小鼠,稱小鼠術(shù)前及術(shù)后體重,分別于上午8:00-11:00予以1%戊巴比妥40mg/kg腹腔注射麻醉后參照Higgins,Anderson[1]和湯朝暉,吳孟超[2]等及Mehrdad N

3、ikfarjam[3]的方法,切除小鼠肝臟約70%,建立模型成功后,稱切除肝臟濕重,并分別于術(shù)后6h,12h,24h,36h及48h予以1%戊巴比妥40mg/kg腹腔注射麻醉,1ml空針下腔靜脈采血0.8ml,室溫靜置30min后4000 r/min離心5min,離心后留取血清檢測(cè)各組術(shù)后AST、ALT、AKP、GGT、Glu的變化,并迅速切取殘肝稱肝臟濕重后福爾馬林固定,計(jì)算肝再生率及肝臟指數(shù),并取肝臟組織進(jìn)行蘇木素-伊紅(HE)染色

4、,研究肝再生過程中肝細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變。每個(gè)樣本隨機(jī)取高倍鏡下10個(gè)視野,計(jì)數(shù)每個(gè)高倍視野下100個(gè)細(xì)胞中處于有絲分裂狀態(tài)細(xì)胞或雙核細(xì)胞所占比率,以增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的免疫組織化學(xué)染色作為肝再生的指標(biāo),高倍鏡下,每張切片隨機(jī)取高倍鏡下10個(gè)視野,計(jì)數(shù)每個(gè)高倍鏡下100個(gè)肝細(xì)胞中PCNA陽性細(xì)胞數(shù),細(xì)胞核呈棕色(無論其深淺)均視為陽性肝細(xì)胞。PCNA標(biāo)記指數(shù)=PCNA陽性肝細(xì)胞數(shù)/1000x100%。Caspase-3免疫組化染色在高

5、倍鏡下(10×40)隨機(jī)觀察5個(gè)視野,胞質(zhì)內(nèi)有棕黃色者為陽性細(xì)胞,計(jì)數(shù)每個(gè)高倍視野下陽性細(xì)胞數(shù)。
   結(jié)果:
   HE染色:成功建立小鼠肝部分切除肝臟急性損傷模型后,實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組術(shù)后肝組織均明顯增生,HE染色光鏡觀察示,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組術(shù)前肝組織切片蘇木素-伊紅(HE)染色顯示,術(shù)前正常肝小葉結(jié)構(gòu)清晰,肝細(xì)胞索呈放射狀排列,肝血竇清晰,肝切除術(shù)后與術(shù)前比較,可見明顯的組織增生,細(xì)胞體積變大,增生的肝細(xì)胞索排列結(jié)構(gòu)有不

6、同程度紊亂,且雙核細(xì)胞數(shù)目有明顯增加,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組術(shù)后肝組織切片HE染色雙核細(xì)胞計(jì)數(shù)較術(shù)前升高,對(duì)照組升高較實(shí)驗(yàn)組升高明顯,對(duì)照組術(shù)后12h、24h、36h、48h較術(shù)前升高明顯,有明顯差異(P<0.05);術(shù)后6h較術(shù)前升高不明顯,無明顯差異(P>0.05);實(shí)驗(yàn)組術(shù)后24h、36h、48h較術(shù)前升高明顯,有明顯差異(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較,對(duì)照組術(shù)后12h、24h、36h各時(shí)間點(diǎn)雙核細(xì)胞計(jì)數(shù)較實(shí)驗(yàn)組雙核細(xì)胞升高明顯,有

7、明顯差異(P<0.01);實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較,對(duì)照組術(shù)后48h雙核細(xì)胞計(jì)數(shù)較實(shí)驗(yàn)組雙核細(xì)胞升高明顯,有明顯差異(P<0.05)。術(shù)后6h兩組之間雙核細(xì)胞數(shù)目比較無明顯差異(P>0.05)。
   肝再生率及肝臟指數(shù):各組之間術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)小鼠肝臟指數(shù)均小于正常組,有明顯差異(P<0.01),術(shù)后6h及術(shù)后12h實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組之間小鼠肝臟指數(shù)無明顯差異(P>0.05),術(shù)后24h、36h實(shí)驗(yàn)組小鼠肝臟指數(shù)小于對(duì)照組,有明顯差異(P<

8、0.05),術(shù)后48h實(shí)驗(yàn)組小鼠肝臟指數(shù)小于對(duì)照組,有明顯差異(P<0.01)。術(shù)后6h、12h實(shí)驗(yàn)組肝再生率均低于對(duì)照組,有明顯差異(P<0.05);術(shù)后24h、36h實(shí)驗(yàn)組肝再生率均低于對(duì)照組,有明顯差異(P<0.01);術(shù)后48h實(shí)驗(yàn)組肝再生率均低于對(duì)照組,兩組間無明顯差異(P>0.05)。
   血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果:術(shù)后血清中ALT、AST含量較術(shù)前明顯升高,實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組ALT均于術(shù)后12h達(dá)到高峰,然后開始下降,實(shí)驗(yàn)組A

9、LT下降較對(duì)照組緩慢;對(duì)照組AST于術(shù)后12h達(dá)到高峰后開始緩慢下降,而實(shí)驗(yàn)組AST于術(shù)后24h達(dá)到高峰,且峰值較對(duì)照組大;實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)血清中AST、ALT的含量較術(shù)前有明顯升高,有明顯差異(P<0.01);術(shù)后36h實(shí)驗(yàn)組血清中ALT含量高于對(duì)照組,有明顯差異(P<0.01);術(shù)后48h實(shí)驗(yàn)組血清中ALT含量高于對(duì)照組,有明顯差異(P<0.05);術(shù)后12h、36h、48h實(shí)驗(yàn)組血清中AST含量高于對(duì)照組,有明顯差異(P

10、<0.05);術(shù)后24h實(shí)驗(yàn)組血清中AST含量高于對(duì)照組,有明顯差異(P<0.01)。小鼠肝部分切除術(shù)后血清中AKP、GGT。含量較術(shù)前明顯升高。均于術(shù)后24h達(dá)到高峰,組間比較無明顯差異。術(shù)后6h、12h、24h、36h、48h血清中AKP、GGT較術(shù)前升高,有明顯差異(P<0.05)。小鼠肝部分切除術(shù)后血清中G1u水平較術(shù)前下降,與術(shù)前相比較有明顯差異(P<0.05)。
   免疫組織化學(xué)染色:實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組小鼠肝部分切除術(shù)

11、后各時(shí)間點(diǎn)肝組織PCNA的表達(dá)與術(shù)前相比明顯升高,有明顯差異(P<0.01);免疫組化示實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較,術(shù)后6h小鼠殘肝組織PCNA的表達(dá)均較對(duì)照組低,兩組比較有明顯差異(P<0.05);術(shù)后12h、24h、36h、48h小鼠殘肝組織PCNA的表達(dá)均較對(duì)照組低,兩組比較有明顯差異(P<0.01)。caspase-3免疫組化可見術(shù)后6小時(shí)實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組均有陽性表達(dá),兩組比較有明顯差異(P<0.05),其余各時(shí)間點(diǎn)未見明顯陽性表達(dá)。

12、r>   結(jié)論:
   1、在肝部分切除后,數(shù)小時(shí)內(nèi)即出現(xiàn)轉(zhuǎn)氨酶升高,24h內(nèi)達(dá)到高峰,在該階段要重視肝功能的支持措施。
   2、小鼠肝部分切除術(shù)造成的急性肝損傷可誘導(dǎo)殘肝細(xì)胞通過細(xì)胞有絲分裂及細(xì)胞體積增大實(shí)現(xiàn)肝再生,并逐步使肝功能恢復(fù)。
   3、在小鼠肝部分切除術(shù)后急性肝損傷后6h內(nèi)殘肝即已經(jīng)啟動(dòng)再生,12小時(shí)后開始有絲分裂,約在術(shù)后36小時(shí)細(xì)胞有絲分裂達(dá)高峰,且48h內(nèi)肝再生逐漸增強(qiáng)。
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