IL-22對肝損傷小鼠部分肝切除后肝再生的作用.pdf

1、肝臟疾病多種多樣，包括各種原因?qū)е碌牟《拘曰蚓凭愿窝?、肝臟纖維化和肝細(xì)胞癌，嚴(yán)重威脅到人類的健康。白細(xì)胞介素-22（interleukin-22，IL-22）因子是一種近年來新研究發(fā)現(xiàn)的CD4+ Th細(xì)胞因子的一種，參與機(jī)體免疫系統(tǒng)的多種病理反應(yīng)，能夠促進(jìn)組織的快速修復(fù)和促進(jìn)炎癥反應(yīng)的雙重功效。然而對于其具體作用的分子生物學(xué)機(jī)制我們尚不十分明確。目前對白細(xì)胞介素-22的作用機(jī)理研究尚處于初始階段，白細(xì)胞介素-22與其他細(xì)胞因子的相關(guān)性

2、及具體作用，仍需我們應(yīng)用相關(guān)科學(xué)技術(shù)及實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)行更深的探索。近年來對白細(xì)胞介素-22的探索也取得了一定的成效，為其在肝臟疾病中肝損傷修復(fù)和促進(jìn)肝再生的作用機(jī)制研究奠定了基礎(chǔ)。本研究分為兩個部分：
　　第一部分：小鼠70％肝切除模型的改良。
　　目的：建立一種高效、簡易的小鼠70％肝臟切除模型，為研究肝臟損傷修復(fù)和再生的機(jī)制研究提供新的模型平臺。
　　方法：8-12周的C57BL/6雄性小鼠(20-25g)150只，隨

3、機(jī)分成兩組：經(jīng)典組（保留入肝血流組）和改良組（阻斷入肝血流組）。分別采用兩種建模方法建立小鼠70％肝臟切除模型。比較術(shù)后小鼠的生存率和肝再生情況。
　　結(jié)果：存活率改良組（97.3％）顯著高于經(jīng)典組（86.7％），其中術(shù)后膽漏、出血和腔靜脈狹窄的發(fā)生率，改良法顯著低于經(jīng)典法；而兩組肝切除術(shù)后肝臟再生情況無顯著差異。
　　結(jié)論：通過結(jié)扎血管阻斷入肝血流、結(jié)扎膽道阻斷入肝血流，然后行70％肝葉切除法建立的小鼠肝切除模型，簡便易行

4、，并發(fā)癥少,成功率高，為肝再生的細(xì)胞分子生物學(xué)機(jī)制研究提供了理想的肝切除模型。
　　第二部分：外源性的白細(xì)胞介素-22對刀豆蛋白A介導(dǎo)的肝損傷小鼠部分肝切除后肝再生的作用。
　　目的：探討刀豆蛋白 A介導(dǎo)的肝損傷小鼠行部分肝切除術(shù)后白細(xì)胞介素-22對其肝臟再生的治療作用及機(jī)制研究。
　　方法：100只C57BL/6小鼠，隨機(jī)分成PH組（單一70％肝切除組）、ConA組（單一刀豆蛋白A損傷組）、ConA+PH組（刀豆蛋白

5、A損傷后行70％肝切除組）和ConA+IL-22+PH組（刀豆蛋白A損傷后經(jīng)白細(xì)胞介素-22干預(yù)再行70％肝切除組），然后每組分別于術(shù)后32h、40h、48h、1w、2w各處死5只，取其血清和肝臟組織。稱肝葉重量計(jì)算肝再生率，生化檢測不同時間點(diǎn)肝功能（丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、白蛋白（ALB））的變化，做病理切片觀察各時間點(diǎn)的病理損傷，免疫組化法檢測不同時間點(diǎn)肝臟組織中增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）的含量，計(jì)算PCN

6、A指數(shù)，Western Blot檢測細(xì)胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、信號傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3(STAT3)水平了解細(xì)胞周期改變情況，實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RQ-PCR）檢測不同時間點(diǎn)甲胎蛋白信使核糖核酸(AFPmRNA)的表達(dá)。采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)和線性相關(guān)分析比較各組的變化。
　　結(jié)果：經(jīng)白細(xì)胞介素-22處理后，小鼠肝再生顯著，術(shù)后各時間點(diǎn)（40h、48h、1w、2w），ConA+PH+IL-22干預(yù)組小鼠肝質(zhì)量/體質(zhì)

7、量（3.16±0.17，3.34±0.13，4.19±0.14，5.14±0.16）明顯高于ConA+PH組（2.95±0.14、3.09±0.14、3.78±0.10、4.89±0.12）,顯著減輕 ConA對肝組織的損傷，且在術(shù)后各時間點(diǎn)ConA+PH損傷組再生肝組織內(nèi) STAT3蛋白和 Cyclin D1蛋白表達(dá)量以及AFPmRNA基因的水平明顯低于其余組，經(jīng)白細(xì)胞介素-22預(yù)處理后再生肝組織內(nèi)STAT3蛋白和Cyclin D1蛋