沙蜇毒素致紅細(xì)胞損傷的機(jī)制初步探究.pdf

1、研究目的:
　　研究沙蜇毒素致紅細(xì)胞損傷（溶血活性）的機(jī)制，評估不同濃度的維生素C對沙蜇毒素溶血活性的影響。
　　研究方法:
　　采用沙蜇自溶法，從沙蜇中分離刺絲囊細(xì)胞，利用超聲波細(xì)胞破碎法提取刺絲囊細(xì)胞中的毒素，以牛血清白蛋白為標(biāo)準(zhǔn)，測得毒素蛋白的濃度。選取健康自愿者，男女各8名，各抽取新鮮血3～4ml，重復(fù)洗滌紅細(xì)胞2~3次后，配制成20%（V/V）人血紅細(xì)胞懸浮液和0.45%（V/V）人血紅細(xì)胞懸浮液。取不同體積

2、的沙蜇毒素加入到1ml的20%人血紅細(xì)胞懸浮液中，加0.9%的氯化鈉溶液稀釋至5ml，使得沙蜇毒素終濃度為0、2、4、8、16μg/ml，應(yīng)用硫代巴比妥（TBA）法，檢測不同濃度的沙蜇毒素作用后，溶血反應(yīng)體系當(dāng)中的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛（MDA）的水平。取一定體積的沙蜇毒素，加入到1ml的0.45%人血紅細(xì)胞懸浮液中，后加入不同體積的維生素C，再加入0.9%的氯化鈉溶液稀釋至5ml，使維生素C終濃度分別0、0.5、1、1.5、2、2.5m

3、mol/L，測定不同濃度的維生素C對沙蜇毒素溶血活性的影響。
　　結(jié)果:
　　實驗數(shù)據(jù)所得，本研究中沙蜇毒素蛋白濃度為395.45μg/ml。不同濃度的沙蜇毒素作用后，紅細(xì)胞溶血體系中的 MDA水平隨毒素劑量增大呈依賴性升高，實驗中沙蜇毒素濃度為16μg/ml時，MDA濃度由基礎(chǔ)濃度（0.79±0.07μmol/L）升高至（19.90±1.22μmol/L），采用單因素方差分析及LSD-t檢驗，實驗各組與對照組比較，差異有統(tǒng)

4、計學(xué)意義（P＜0.05）；實驗各組互相比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。所研究濃度范圍內(nèi)的維生素C可以拮抗沙蜇毒素的溶血活性，隨著維生素C濃度的升高，溶血活性不斷下降。當(dāng)維生素C濃度在0~1mmol/L范圍內(nèi)，毒素的溶血活性下降明顯，由75.79%（未添加維生素C）顯著下降至31.95%；當(dāng)維生素C濃度在1~2.5mmol/L范圍內(nèi)，溶血活性由31.95%下降至26.66%，下降趨勢減慢。采用單因素方差分析及LSD-t檢驗，實驗各

5、組與對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；實驗各組互相比較，當(dāng)實驗中維生素C濃度為1.5、2、2.5mmol/L時，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），其余各組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　脂質(zhì)過氧化損傷是沙蜇毒素溶血活性的機(jī)制之一，有其他機(jī)制參與了溶血過程。維生素C能夠一定程度上抑制沙蜇毒素的溶血活性，可以作為預(yù)防和治療沙蜇蜇傷的候選藥物。沙蜇毒素中存在對紅細(xì)胞產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化損傷的成分，為沙蜇毒