致SLE患者貧血的紅細(xì)胞凋亡損傷研究.pdf

1、研究背景：系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）患者隨病情進(jìn)展可出現(xiàn)不同程度的貧血癥狀，貧血率可高達(dá)70%以上，慢性病性貧血最常見。SLE患者因伴有自由基代謝障礙，活性氧類聚集從而形成機(jī)體過氧化狀態(tài)。研究證實(shí)紅細(xì)胞在氧化壓力、能量供給不足、感染等因素作用下凋亡率增加。探討紅細(xì)胞凋亡損傷可能是對研究SLE患者貧血病因的科學(xué)補(bǔ)充。
　　目的：研究系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）貧血患者紅細(xì)胞凋亡損傷，并探討其可能的發(fā)生機(jī)制。
　　方法：本研究分別以S

2、LE患者和健康獻(xiàn)血員作為實(shí)驗組和對照組，分為紅細(xì)胞實(shí)驗、血漿孵育紅細(xì)胞實(shí)驗和血漿抗氧化能力實(shí)驗三部分。紅細(xì)胞實(shí)驗為研究兩組對象紅細(xì)胞凋亡損傷。分別收集20例兩組對象的新鮮全血，測量血細(xì)胞參數(shù)。常規(guī)分離出紅細(xì)胞，制成一定濃度的紅細(xì)胞懸液。經(jīng)Annexin V-FITC熒光染色，利用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞體積大小，同時用激光共聚焦顯微鏡觀察凋亡細(xì)胞的形態(tài)；經(jīng)熒光探針Fluo-3/AM和DCFH-DA標(biāo)記，利用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離

3、子濃度和胞內(nèi)活性氧類含量；熒光標(biāo)記二抗-流式法檢測胞內(nèi)神經(jīng)酰胺含量。分別比較兩組各項指標(biāo)差異。血漿孵育紅細(xì)胞實(shí)驗為研究 SLE患者血漿對紅細(xì)胞調(diào)亡損傷的影響，分別收集20例兩組對象新鮮全血，分離出的血漿用以孵育健康人O型紅細(xì)胞。24小時后用相同方法檢測兩組紅細(xì)胞凋亡率及體積、胞內(nèi)鈣離子濃度、神經(jīng)酰胺和活性氧類含量，比較兩組差異。另外利用酶標(biāo)儀測量比較兩組血漿總抗氧化能力差異。
　　結(jié)果：實(shí)驗組血紅蛋白含量及血細(xì)胞比容均明顯低于正常

4、對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001）；紅細(xì)胞實(shí)驗中，實(shí)驗組細(xì)胞凋亡率、胞內(nèi)鈣離子濃度顯著高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.001）；實(shí)驗組胞內(nèi)活性氧類含量明顯高于對照組（P<0.01）；相比健康獻(xiàn)血員，患者紅細(xì)胞體積縮小，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；兩組細(xì)胞胞內(nèi)神經(jīng)酰胺含量無明顯差異；激光共聚焦熒光顯微鏡下可以觀察到凋亡紅細(xì)胞膜上的FITC熒光信號。血漿孵育紅細(xì)胞實(shí)驗中，實(shí)驗組細(xì)胞凋亡率、胞內(nèi)鈣離子濃度顯著高于對照組，差