體外儲存致懸浮紅細(xì)胞凋亡損傷機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究體外儲存期懸浮紅細(xì)胞（suspenged erythrocytes）在不同保存時間引起紅細(xì)胞凋亡損傷的影響，并探討其可能的發(fā)生機(jī)制。
　　方法：采集8例健康獻(xiàn)血員全血，常規(guī)分離白細(xì)胞和血漿制成懸浮紅細(xì)胞。置4℃貯血冰箱儲存，在保存后3 d、11 d、19 d、27 d和35 d共5個時相點，分別留取相應(yīng)保存期的懸浮紅細(xì)胞，利用Annexin V-FITC進(jìn)行熒光染色，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測不同保存期紅細(xì)胞凋亡率及紅細(xì)胞體積大小

2、變化，同時用熒光顯微鏡觀察PS外翻的凋亡的紅細(xì)胞形態(tài)；利用Fluo-3/AM作為熒光探針，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測不同保存期紅細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度；同時留取不同保存期懸浮紅細(xì)胞上清液，利用酶標(biāo)儀檢測上清液在405 nm的吸光度并計算紅細(xì)胞溶血率。
　　結(jié)果：不同保存期的懸浮紅細(xì)胞經(jīng)過熒光染色，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測后發(fā)現(xiàn)，紅細(xì)胞凋亡率和紅細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度逐漸增加，與保存3 d的懸浮紅細(xì)胞相比較，11d和19 d差異不明顯，至27 d差異均有統(tǒng)計學(xué)意

3、義（P<0.05），并且熒光顯微鏡下可以觀察到凋亡紅細(xì)胞膜上的FITC熒光信號；用酶標(biāo)儀檢測上清液中血紅蛋白的吸光度后發(fā)現(xiàn)，與保存3 d的紅細(xì)胞相比較，11 d、19 d和27 d溶血率增加不明顯，至35 d差異才有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；而隨著保存時間的增加，紅細(xì)胞體積逐漸變小，與保存3 d的紅細(xì)胞相比較，11 d和19 d體積變小差異不明顯，至27d差異有顯著性（P<0.05）。
　　結(jié)論：體外儲存的懸浮紅細(xì)胞隨著保存時間