酶母細(xì)胞自噬相關(guān)分子機(jī)制的初步探究.pdf

1、細(xì)胞自噬(Autophagy)是真核生物中高度保守的、對(duì)維持真核生物健康起關(guān)鍵作用的一類亞細(xì)胞降解途徑。自二十世紀(jì)九十年代初在酵母中展開(kāi)了相關(guān)基因的篩選和細(xì)胞生物學(xué)的研究以來(lái)，其分子機(jī)制的研究已取得了很大進(jìn)展，酵母也成為了細(xì)胞自噬分子機(jī)制研究最為充分的模式生物。同時(shí)哺乳動(dòng)物中細(xì)胞自噬的研究也越來(lái)越受到關(guān)注，已有很多證據(jù)表明細(xì)胞自噬在生物體生長(zhǎng)發(fā)育、免疫防御、細(xì)胞程序性死亡、腫瘤發(fā)生發(fā)展、退行性神經(jīng)病變抑制等方面有非常重要的作用。

2、　　 本論文主要研究Atg14、Atg8的分子機(jī)制，二者都是酵母細(xì)胞自噬的中心機(jī)制蛋白，其中Atg14是Ⅲ型PI3K復(fù)合物Ⅰ的組分，負(fù)責(zé)將整個(gè)復(fù)合物定位于PAS(phagophore assembly site)位點(diǎn)，該位點(diǎn)是自噬體形成的起始位點(diǎn)。本論文研究發(fā)現(xiàn)在氮饑餓條件下，酵母細(xì)胞中Atg14的蛋白表達(dá)會(huì)明顯上升，與此同時(shí)ATG14的mRNA水平也有明顯上升，說(shuō)明引起ATG14表達(dá)變化的原因發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平。通過(guò)篩選潛在的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因

3、子，我們發(fā)現(xiàn)Gln3、Gzf3是ATG14表達(dá)的正調(diào)控因子。然后我們通過(guò)構(gòu)建低量表達(dá)Atg14的菌株來(lái)研究表達(dá)量對(duì)細(xì)胞自噬的作用，結(jié)果表明，在實(shí)驗(yàn)條件下，表達(dá)量的上升對(duì)細(xì)胞自噬的發(fā)生不是必須的。
　　 Atg8是一種泛素樣蛋白，其與PE結(jié)合，在自噬體形成過(guò)程中，被募集到PAS，位于雙層膜結(jié)構(gòu)的兩側(cè)，調(diào)控它的延伸。當(dāng)自噬體形成之后，大部分Atg8從雙層膜上解離回到細(xì)胞質(zhì)。其到達(dá)PAS的數(shù)量可以調(diào)控自噬體的大小，是細(xì)胞自噬至關(guān)重要的

4、一個(gè)蛋白。本論文研究發(fā)現(xiàn)，Atg8在細(xì)胞質(zhì)與自噬體膜之間的正常循環(huán)是細(xì)胞自噬必須的，Atg8滯留于自噬體膜上會(huì)明顯影響整個(gè)自噬體的形成過(guò)程。研究還發(fā)現(xiàn)，Atg2-Atg18復(fù)合體在Atg8的循環(huán)中也起到重要作用，Atg1的激酶活性是Atg8從自噬體解離的關(guān)鍵信號(hào)。另外還發(fā)現(xiàn)，Atg8對(duì)Atg9的循環(huán)影響不大。
　　 綜上所述，本論文主要研究了細(xì)胞自噬分子機(jī)制的相關(guān)關(guān)鍵點(diǎn)，為進(jìn)一步研究自噬體形成的分子機(jī)制提供一定參考。