家蠶Bme細(xì)胞自噬與凋亡關(guān)系初步研究.pdf

1、近年，細(xì)胞自噬與細(xì)胞凋亡關(guān)系的研究進(jìn)展備受關(guān)注，因?yàn)樗婕暗缴锏陌l(fā)育，聯(lián)系著一些疾病的發(fā)生，演繹著生命的維系與延續(xù)等。有關(guān)哺乳動物細(xì)胞，特別是癌細(xì)胞自噬與凋亡相互關(guān)系的研究已經(jīng)取得了許多重要的進(jìn)展，二者的關(guān)系比較復(fù)雜，因細(xì)胞類型、誘導(dǎo)因子或細(xì)胞的狀態(tài)等因素不同，或相互促進(jìn)、相互拮抗，相互獨(dú)立。目前有關(guān)昆蟲細(xì)胞自噬與細(xì)胞凋亡關(guān)系的報道尚少，需要深入開展此方面的研究。
　　 本文以離體培養(yǎng)的家蠶細(xì)胞Bme為材料，采用多種不同的方法

2、進(jìn)行誘導(dǎo)，提高家蠶細(xì)胞Bme的自噬水平，通過熒光定性定量分析，電子顯微鏡技術(shù)，流式細(xì)胞術(shù)，酶學(xué)分析和瓊脂糖凝膠電泳等技術(shù)，研究了離體培養(yǎng)的家蠶細(xì)胞高水平自噬作用對細(xì)胞凋亡的影響。
　　 結(jié)果表明：雷帕霉素處理和氨基酸饑餓都能誘導(dǎo)家蠶細(xì)胞Bme內(nèi)MDC染色陽性小泡(自噬泡和自噬溶酶體)數(shù)量增多和體積增大；電鏡觀察表明雷帕霉素處理4h后，細(xì)胞內(nèi)的線粒體數(shù)量減少，體積膨大，自噬泡數(shù)量增多。初步的定量分析表明經(jīng)饑餓后，4h時發(fā)生高水平自

3、噬作用的細(xì)胞從對照組6.1％上升至了15.9％，8h時發(fā)生高水平自噬作用的細(xì)胞下降至12.4％。誘導(dǎo)早期細(xì)胞內(nèi)caspase-3的活性較低，但是后期細(xì)胞內(nèi)caspase-3的活性顯著升高，在12h時caspase-3的活性是對照組細(xì)胞的近10倍。同時，兩種自噬誘導(dǎo)方法處理的細(xì)胞經(jīng)AnnexinV-FITC/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)細(xì)胞膜磷脂酰絲氨酸外翻，細(xì)胞的凋亡率顯著增加。雷帕霉素處理12h的早期凋亡細(xì)胞率從5％提高到24％，氨基酸

4、饑餓處理12h的早期細(xì)胞凋亡率從5％提高到16％。光學(xué)顯微鏡下可明顯看到形成的凋亡小體，經(jīng)DAPI染色可以看到染色質(zhì)凝集和碎裂。瓊脂糖凝膠電泳檢測發(fā)現(xiàn)DNA片段化，出現(xiàn)梯形條帶。采用3甲基腺嘌呤抑制細(xì)胞自噬可以顯著降低饑餓細(xì)胞的凋亡率，但細(xì)胞壞死的比例卻有所增加。同時還表明，抑制家蠶細(xì)胞Bme基礎(chǔ)水平的自噬作用，也不利于細(xì)胞生存。
　　 以上結(jié)果表明，在一定條件下家蠶細(xì)胞的誘導(dǎo)性高水平自噬作用先于細(xì)胞凋亡或至少同時發(fā)生，并且高水