肝星狀細(xì)胞自噬水平與細(xì)胞增殖、凋亡水平的相關(guān)性研究.pdf

1、目的：探討3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）抑制大鼠肝星狀細(xì)胞（HSC-T6）自噬后對HSC-T6細(xì)胞活化、增殖、凋亡、周期的影響及可能的作用機(jī)制。
　　方法：體外培養(yǎng)大鼠肝星狀細(xì)胞HSC-T6，用不同濃度的3-MA處理，分為四個(gè)實(shí)驗(yàn)組，即空白對照組（0.0mmo l/l），低濃度組（2.5mmo l/l），中濃度組（5.0mmo l/l），高濃度組（10.0 mmo l/l）。用MTT法觀察細(xì)胞增殖活力；

2、用流式細(xì)胞技術(shù)檢測4組細(xì)胞的周期和凋亡情況；用蛋白印跡法（Western blot）分析不同濃度3-MA作用下各組HSC-T6細(xì)胞活化標(biāo)志α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)、自噬標(biāo)志蛋白LC3Ⅱ、細(xì)胞周期蛋白Cyclin A、CyclinB1以及凋亡關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白Bcl-2、BAX的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：不同濃度的3-MA作用于HSC-T6細(xì)胞24h后，3-MA實(shí)驗(yàn)組的HSC-T6細(xì)胞增殖明顯受到抑制，細(xì)胞凋亡率逐漸增高（均P<0.0

3、5）；S期及G2/M期細(xì)胞比例均明顯增加（均 P<0.05）；Western blot顯示加入3-MA處理后 HCS-T6細(xì)胞LC3Ⅱ、α-SMA、Cyclin A、CyclinB1、Bcl-2表達(dá)量均逐漸下降（均P<0.05），BAX表達(dá)量逐漸上調(diào)（P<0.05）。
　　結(jié)論：⑴自噬抑制劑3-MA下調(diào)HSC-T6細(xì)胞的自噬水平，抑制LC3Ⅰ向LC3Ⅱ轉(zhuǎn)化，同時(shí)抑制HSCs的增殖和活化效應(yīng)；⑵3-MA抑制HSC-T6細(xì)胞自噬后可分