槲皮素誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞死亡機(jī)制中自噬與凋亡相關(guān)性的研究.pdf

1、目的：研究槲皮素(quercetin，Que)誘導(dǎo)的人乳腺癌MCF—7細(xì)胞死亡中的作用，初步探討自噬和凋亡機(jī)制在MCF—7細(xì)胞死亡中的相關(guān)性。 方法：用不同濃度的Que處理MCF—7細(xì)胞，采用MTT法測(cè)定Que對(duì)MCF—7細(xì)胞增殖的抑制作用；應(yīng)用MODC熒光染色，Hochest33258染色，AO/EB染色觀察給藥后自噬和凋亡的發(fā)生；分別用ALLN抑制m—calpain、z—IETD—FMK抑制caspase8、E64d抑制Ca

2、thepsins，采用MTT法結(jié)合LDH漏出率、免疫熒光法和流式細(xì)胞僅研究抑制自噬與凋亡機(jī)制在Que誘導(dǎo)的MCF—7細(xì)胞死亡中的關(guān)系。 結(jié)果：Que對(duì)MCF—7細(xì)胞生長(zhǎng)有顯著的抑制作用，且此作用呈明顯的時(shí)間、劑量依賴性：(AO/EB)和MDC熒光染色顯示Que給藥后可誘導(dǎo)MCF—7細(xì)胞發(fā)生自噬和凋亡，24h自噬和凋亡同時(shí)存在，自噬特異性蛋白LC3被激活：LDH漏出率實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在Que給藥前用3—MA阻斷自噬或者氯喹(ehlo

3、roquine，Chlo)堿化溶酶體，Que對(duì)MCF—7細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用增強(qiáng)；堿化溶酶體后，流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，Que可使MCF—7細(xì)胞的凋亡峰提前，免疫熒光法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)LC3表達(dá)減少。應(yīng)用caspase8抑制劑可增強(qiáng)Que對(duì)MCF—7細(xì)胞的抑制作用，但是cathepsins廣譜抑制劑E64d能降低Que對(duì)MCF—7的生長(zhǎng)抑制。 結(jié)論：Que能明顯抑制MCF—7細(xì)胞的生長(zhǎng)，并誘導(dǎo)其發(fā)生自噬和凋亡。在Que誘導(dǎo)的MCF—7細(xì)胞