大鼠腦出血模型中神經(jīng)細(xì)胞凋亡與自由基水平的相關(guān)性研究.pdf

1、本文通過使用不同劑量羥自由基清除劑對(duì)大鼠腦出血模型進(jìn)行干預(yù)，觀察腦組織中不同自由基水平對(duì)于神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞凋亡的影響，并觀察自由基對(duì)于TNF-α、caspase-3、8表達(dá)以及激活的影響，初步探討自由基在腦出血后細(xì)胞凋亡中的作用機(jī)制。 第一部分腦出血模型中自由基含量與凋亡的相關(guān)性研究。 (一)目的：研究腦出血后血腫周圍組織不同自由基水平對(duì)于細(xì)胞凋亡的影響 (二)方法：動(dòng)物隨機(jī)分為4組，假手術(shù)組、模型組、易達(dá)拉奉組

2、1(1mg/kg)、易達(dá)拉奉組2(3mg/kg)，各組又根據(jù)不同時(shí)間點(diǎn)分為6h、12h、24h、48h、72h、7d、14d七個(gè)亞組。通過立體定向技術(shù)，采用二次注血/退針方法向成年SD大鼠左尾殼核注入自體血80ul，制作大鼠腦出血?jiǎng)游锬Ｐ?，術(shù)后參照Bederson法進(jìn)行神經(jīng)病功能缺陷評(píng)分，判斷模型成功。應(yīng)用分光光度計(jì)法檢測(cè)血腫周圍MDA及羥自由基含量，通過免疫組化檢測(cè)血腫組織周圍細(xì)胞凋亡數(shù)，分析腦血后血腫周圍組織自由基水平和凋亡相關(guān)性。

3、 (三)結(jié)果： 1、模型組產(chǎn)生羥自由基能力及MDA含量較假手術(shù)組和兩組藥物干預(yù)組明顯升高，具有顯著性差異；其他各組產(chǎn)生羥自由基能力及MDA含量均具有顯著性差異。 2、假手術(shù)組于針道周圍可見少量TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞，隨時(shí)間變化略有增加，3天時(shí)最多，之后逐漸下降。模型組和兩種劑量的藥物干預(yù)組均于6h即可觀察到TUNEL 陽(yáng)性細(xì)胞，24小時(shí)明顯增加，3天時(shí)達(dá)到高峰，7d時(shí)明顯減少，14天時(shí)于血腫周邊仍可見少量陽(yáng)性細(xì)胞。將

4、各組問進(jìn)行比較，差異均具有顯著性。 3、凋亡細(xì)胞數(shù)與腦組織產(chǎn)生自由基能力(r=0.2003)及MDA含量(r=0.6563)具有相關(guān)性。 (四)結(jié)論：腦出血后細(xì)胞凋亡數(shù)和自由基水平變化趨勢(shì)相同，二者具有相關(guān)性，表明自由基對(duì)于出血后腦組織細(xì)胞凋亡起作用，自由基可以誘導(dǎo)出血后神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞凋亡。 第二部分腦出血模型中自由基誘導(dǎo)凋亡相關(guān)通路的探討。 (一)目的：研究腦出血后自由基對(duì)于細(xì)胞凋亡通路的影響。

5、 (二)方法：通過免疫組化半定量檢測(cè)腦出血后 TNF-α的表達(dá)，并通過Westernblot檢測(cè)腦組織中Caspase-3、8的表達(dá)及激活，初步探討了腦出血后自由基相關(guān)性凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。 (三)結(jié)果： 1、出血后腦組織血腫周邊組織、大腦皮層、海馬等區(qū)域TNF-α表達(dá)及分泌均較假手術(shù)明顯升高，差異具有顯著性，，模型組和藥物干預(yù)組表達(dá)水平有差異，可認(rèn)為自由基與 TNF-α水平具有相關(guān)性，自由基可以誘導(dǎo)TNF-α表達(dá)。