PAS-Na對錳致大鼠原代小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥損傷干預(yù)作用的研究.pdf

1、[目的]研究錳對大鼠原代小膠質(zhì)細(xì)胞氧化損傷和炎癥因子白細(xì)胞介素(IL-1β、IL-6)、腫瘤壞死因子（TNF-α）、前列腺素2(PGE2)表達(dá)的影響，探討對氨基水楊酸鈉(PAS-Na)對錳導(dǎo)致的小膠質(zhì)細(xì)胞損傷的干預(yù)作用。
　　[方法]
　　(1)原代培養(yǎng)的小膠質(zhì)細(xì)胞經(jīng)過分離提純和鑒定后，①錳毒性試驗(yàn):種于96孔板中的細(xì)胞分別給予0、200、300、400、500μmol/L濃度MnCl2處理24h。②PAS-Na無毒篩選試驗(yàn)

2、:孔接種于96孔板中的細(xì)胞分別給予0、50、150、450μmol/L濃度PAS-Na處理24h。③PAS-Na干預(yù)試驗(yàn):小膠質(zhì)細(xì)胞被隨機(jī)分為對照組、染錳組、PAS對照組、50、150、450-PAS干預(yù)組，其中對照組、染錳組、PAS對照組給予正常DMEM完全培養(yǎng)基，50、150、450-PAS干預(yù)組給予400μmol/L濃度MnCl2處理24h后，對照組給予正常DMEM完全培養(yǎng)基換液，染錳組給予400μmol/L濃度MnCl2處理24

3、h，PAS對照組給予450μmol/L濃度PAS-Na處理24h，50、150、450-PAS干預(yù)組分別加入50、150、450μmol/L濃度PAS-Na處理24h。
　　(2)用MTT試劑測定小膠質(zhì)細(xì)胞存活率，DCFH-DA探針標(biāo)記小膠質(zhì)細(xì)胞氧化損傷情況，酶聯(lián)免疫吸附法測定細(xì)胞上清液IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2炎癥因子含量，熒光定量PCR檢測小膠質(zhì)細(xì)胞IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表達(dá)。
　　[

4、結(jié)果]細(xì)胞存活率檢測:低濃度的MnCl2能刺激原代小膠質(zhì)細(xì)胞的增殖存活率增加，高濃度MnCl2對小膠質(zhì)細(xì)胞有一定的細(xì)胞毒性，MnCl2處理24h后小膠質(zhì)細(xì)胞存活率在400μmol/L和500μmol/L組比對照組低。PAS-Na處理24h后，與對照組比較，各劑量處理組細(xì)胞形態(tài)和存活率沒有明顯變化。染Mn24h，50、150、450μmol/L濃度PAS干預(yù)24h后，染Mn組細(xì)胞存活率比對照組低。與染Mn組比較，50、150、450-PA

5、S干預(yù)組小膠質(zhì)細(xì)胞存活率升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。細(xì)胞內(nèi)活性氧DCFH-DA標(biāo)記檢驗(yàn):發(fā)現(xiàn)Mn處理可以顯著增加細(xì)胞活性氧的生成，50、150、450-PAS干預(yù)組細(xì)胞活性氧生成比染Mn組少。細(xì)胞上清炎癥因子:與對照組相比，MnCl2使小膠質(zhì)細(xì)胞上清液中IL-1、TNFα分泌增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。50、150、450-PAS干預(yù)組細(xì)胞TNFα表達(dá)低于染Mn組。小膠質(zhì)細(xì)胞IL-1β、TNF-α mRNA表達(dá):與對照組相比，染Mn組IL-1β

6、、TNFα mRNA表達(dá)量增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。50、150、450-PAS干預(yù)組小膠質(zhì)細(xì)胞IL-1β mRNA表達(dá)低于染Mn組。150、450-PAS干預(yù)組小膠質(zhì)細(xì)胞TNF-α mRNA表達(dá)低于染Mn組。
　　[結(jié)論]
　　(1)過量錳暴露會對原代小膠質(zhì)細(xì)胞造成損傷，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)活性氧生成，IL-1β、TNF-α mRNA表達(dá)量升高，其對應(yīng)的炎癥因子IL-1β、TNF-α分泌增加。
　　(2) PAS-Na對錳導(dǎo)致的