芍藥苷對(duì)ox-LDL致內(nèi)皮細(xì)胞損傷的干預(yù)作用.pdf

1、目的：
　　 本研究采用氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein，ox-LDL)誘導(dǎo)人冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(human coronary artery endothelial cells，HCAEC)損傷，建立HCAEC損傷模型，觀察芍藥提取物芍藥苷對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用，并探討其作用機(jī)制，為研發(fā)中藥保護(hù)血管內(nèi)皮，防治動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis，As)的發(fā)生和發(fā)展提供科學(xué)

2、依據(jù)。
　　 方法：
　　 1、Ox-LDL對(duì)體外培養(yǎng)HCAEC的損傷：體外培養(yǎng)HCAEC，用不同濃度的ox-LDL誘導(dǎo)HCAEC損傷24h，進(jìn)行細(xì)胞活性和凋亡率的檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)分正常對(duì)照組(control)、不同濃度的ox-LDL組(濃度依次為25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml和200μg/ml)，用MTT法檢測(cè)細(xì)胞的活性，Hoechst33342/PI雙染檢測(cè)細(xì)胞的凋亡率。
　　 2、檢測(cè)芍藥苷對(duì)內(nèi)

3、皮細(xì)胞的影響：用不同濃度的芍藥苷作用細(xì)胞24小時(shí)，用MTT法檢測(cè)細(xì)胞的活性。
　　 3、觀察芍藥苷對(duì)ox-LDL致HCAEC損傷的干預(yù)作用：實(shí)驗(yàn)分正常對(duì)照組、100μg/mlox-LDL損傷組、不同濃度的芍藥苷(50μg/ml、100μg/ml和200μg/ml)對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞損傷的干預(yù)組(先用芍藥苷作用細(xì)胞4小時(shí)后，再加入100μg/mlox-LDL作用細(xì)胞24小時(shí))，用MTT法檢測(cè)細(xì)胞的活性；用Hoechst33342/PI雙染

4、觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)的變化，檢測(cè)細(xì)胞的凋亡率；用相應(yīng)的試劑盒檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中丙二醛(malondialdehyele，MDA)含量、超氧化物歧化酶(Supcroxide Dismutase，SOD)和乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase，LDH)的活性；用熒光探針法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS和NO的含量變化，用RT-PCR法從基因水平上檢測(cè)細(xì)胞間黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1，

5、ICAM-1)和血管細(xì)胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1)的含量變化。探討芍藥苷對(duì)ox-LDL致內(nèi)皮細(xì)胞損傷的干預(yù)作用及其作用機(jī)制。
　　 結(jié)果：
　　 1、Ox-LDL對(duì)體外培養(yǎng)HCAEC的影響：不同濃度的ox-LDL與HCAEC共同培養(yǎng)24h，隨著ox-LDL濃度的增加，MTT值逐漸降低，各藥物組與正常對(duì)照組相比，有顯著性差異(p<0.01)；熒光顯微鏡觀

6、察Hoechst33342/PI雙染細(xì)胞形態(tài)：隨著氧化低密度脂蛋白濃度的增高，凋亡細(xì)胞增加并可見染色質(zhì)凝集，細(xì)胞核碎裂等細(xì)胞凋亡的特征性變化，細(xì)胞凋亡率逐漸增加，與正常對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。
　　 2、芍藥苷對(duì)正常細(xì)胞活性的影響：芍藥苷與HCAEC共同培養(yǎng)24小時(shí)，MTT值沒有明顯變化，與正常對(duì)照組相比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。
　　 3、芍藥苷對(duì)細(xì)胞損傷的干預(yù)作用：檢測(cè)結(jié)果顯示，不同濃度的PF干

7、預(yù)組與ox-LDL損傷組相比，MTT值、SOD活性和NO含量均較ox-LDL組顯著增高(p<0.01)，LDH、MDA和ROS含量均較對(duì)照組顯著降低(p<0.01)；熒光顯微鏡觀察Hoechst33342及PI雙染可見芍藥苷組HCAEC的凋亡率比ox-LDL組明顯降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)結(jié)果顯示，各組細(xì)胞均表達(dá)ICAM-1和VCAM-1，ox-LDL組內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的ICAM-1和VCAM-1高于正常對(duì)照組p<0.01)，而