PKD2在Ox-LDL抑制血管內(nèi)皮細胞eNOS活性中的作用.pdf

1、背景：
　　動脈粥樣硬化(atherosclerosis, AS)是發(fā)生于全身大中型動脈血管的致命性病變，是導致心肌梗塞和腦梗塞等疾病發(fā)生的主要因素。研究表明，AS主要發(fā)生于動脈血管的局部性區(qū)域，即動脈血管的彎曲處和分叉處。學界認為局部性血流動力學因素所導致的動脈血管內(nèi)皮損傷是AS形成的一個重要原因。研究發(fā)現(xiàn)，在血流動力學信號傳導的過程中，內(nèi)皮細胞纖毛(Cilia)起著關鍵性作用。其中，主要位于纖毛上的離子通道調(diào)控蛋白PKD2[p

2、olycystic kidney disease2(autosomal dominant)]在血管內(nèi)皮細胞生物學行為和管腔功能穩(wěn)態(tài)維持中起著重要的作用。前期研究結果顯示：低振蕩剪切應力(OS)可顯著地抑制內(nèi)皮細胞 PKD2蛋白的表達，進而導致血管功能障礙乃至AS的形成。同時，已有的研究表明氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)是導致的動脈血管內(nèi)皮損傷以及AS形成的一個重要原因。那么，Ox-LDL促血管內(nèi)皮損傷及AS形成是否是通過抑制PKD2

3、蛋白的表達及其功能途徑？為此，本文開展了Ox-LDL對血管內(nèi)皮細胞PKD2蛋白表達及其功能影響的研究。
　　目的：
　　以血管內(nèi)皮細胞PKD2蛋白功能為研究對象，確定Ox-LDL對PKD2蛋白表達及其功能的影響，以及PKD2調(diào)控eNOS的活性的分子信號機制。
　　研究方法：
　　采用實時定量PCR(RT-PCR)檢測PKD2和CaMKKβ等基因的表達水平；免疫熒光染色法（ICC）、Western blotting

4、等方法檢測PKD2、CaMKKβ、p-AMPK、AMPK、p-eNOS蛋白的表達和活性。
　　結果：
　　① Ox-LDL可顯著抑制內(nèi)皮細胞PKD2的基因和蛋白表達水平，以及eNOS活性。
　?、趦?nèi)皮細胞PKD2基因沉默（siRNA）可顯著抑制PKD2的基因和蛋白表達水平，以及 PKD2下游靶基因CaMKKβ、p-AMPK等蛋白的表達和eNOS活性。
　?、垠w外實驗初步顯示：Ox-LDL可顯著抑制PKD2下游靶基

5、因CaMKKβ的基因表達水平以及AMPK的磷酸化； AMPK的激活劑AICAR可部分補救Ox-LDL下調(diào)的PKD2下游靶基因AMPK和eNOS的活性。體內(nèi)實驗證明：長期高脂喂食可顯著增加ApoE-/-小鼠的體重和血脂水平，抑制PKD2基因的表達水平。
　　結論：
　?、?Ox-LDL可抑制內(nèi)皮細胞PKD2的基因和蛋白表達水平，以及eNOS的活性。
　　② Ox-LDL可能通過PKD2信號途徑下調(diào)內(nèi)皮細胞eNOS的活性，