CLA對Ox-LDL致HCAEC細胞損傷的保護及其機制.pdf

1、背景:動脈粥樣硬化(As)是導致全世界死亡和發(fā)病的主要原因，每年約有167萬人死亡。動脈粥樣硬化主要影響動脈中血管壁的內(nèi)膜層。動脈的內(nèi)皮細胞層為動脈粥樣硬化開始的早期部位，內(nèi)皮細胞的生理損傷或其功能紊亂在動脈粥樣硬化中有著極為重要的作用。脂蛋白主要存在于血漿中，其功能是轉(zhuǎn)運內(nèi)、外源性的脂類物質(zhì)，低密度脂蛋白（ LDL）就是其中的一類。LDL經(jīng)氧化修飾形成氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）。Ox-LDL已被證明參與了動脈粥樣硬化的形成過程，

2、其誘導的血管內(nèi)皮損傷是動脈粥樣硬化的早期發(fā)病機制之一。凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體-1（LOX-1）是一個清道夫受體，主要結(jié)合并調(diào)節(jié) Ox-LDL。在血管內(nèi)皮細胞中，LOX-1受體是Ox-LDL的主要受體。共軛亞油酸（CLA）是一類不飽和的脂肪酸，因其生物活性對癌癥、糖尿病、肥胖以及動脈粥樣硬化有保護作用而備受關(guān)注，但其具體機制尚不明確。本課題主要探討CLA對Ox-LDL造成的人冠狀動脈內(nèi)皮細胞（HCAEC）損傷的影響及其相關(guān)機制。

3、r>　　目的:本課題體外培養(yǎng)人冠狀動脈內(nèi)皮細胞（HCAEC），利用Ox-LDL誘導損傷HCAEC細胞，并用CLA對其進行干預(yù)處理，探討CLA對Ox-LDL造成的HCAEC損傷的影響，進一步研究 CLA對抗動脈粥樣硬化的作用，為動脈粥樣硬化的預(yù)防及其治療策略提供一定的實驗基礎(chǔ)。
　　方法:利用Ox-LDL刺激HCAEC細胞，構(gòu)建HCAEC細胞損傷模型，通過檢測細胞的生物學功能，如細胞形態(tài)、細胞活性、細胞增殖、細胞遷移等；以及對其分泌

4、的 NO、血管活性分子eNOS和ET-1、粘附分子VCAM-1的檢測，觀察研究共軛亞油酸（CLA）對其細胞損傷的影響。之后，通過對細胞損傷上下游分子的檢測，研究共軛亞油酸（CLA）對Ox-LDL致HCAEC細胞損傷的保護機制。
　　結(jié)果:
　　1.通過MTT法對HCAEC細胞活力進行檢測，結(jié)果顯示HCAEC的細胞活性隨著Ox-LDL濃度的增加而降低。CLA對Ox-LDL所造成的細胞活性下降有逆轉(zhuǎn)作用，而且此作用呈劑量依賴作用

5、。
　　2.對HCAEC細胞分泌的NO進行檢測，和正常對照組相比，Ox-LDL可使 HCAEC分泌的NO量下降；和Ox-LDL組比較，經(jīng)CLA干預(yù)后 NO的含量明顯的升高。
　　3. Western Blot顯示，和正常對照組相比較，Ox-LDL組eNOS的表達明顯的減少，而CLA+ Ox-LDL組eNOS的表達高于Ox-LDL組；和正常對照組相比較，Ox-LDL組ET-1的表達明顯的升高，而CLA+ Ox-LDL組ET-1

6、的表達低于Ox-LDL組。
　　4. RT-PCR及Western Blot實驗結(jié)果顯示，Ox-LDL處理組細胞粘附分子VCAM-1的mRNA水平及蛋白水平表達量與正常對照組相比均明顯的增加；與Ox-LDL處理組相比較，CLA+ Ox-LDL組VCAM-1的mRNA水平及蛋白水平表達量降低。
　　5.與正常對照組相比較，Ox-LDL組細胞形態(tài)發(fā)生改變，圓形細胞明顯增多，細胞間的間隙增大，細胞收縮，貼壁不緊，部分脫落；而CLA

7、+ Ox-LDL干預(yù)組細胞形態(tài)變化有所緩和，細胞間的間隙變小，形態(tài)趨于正常。
　　6. Transwell實驗和劃痕實驗結(jié)果均顯示，與正常對照組相比較，Ox-LDL處理組細胞遷移能力增強；與Ox-LDL處理組相比較，CLA+Ox-LDL組細胞的遷移能力下降。
　　7.經(jīng)流式細胞儀的檢測和Hoechst33258檢測，發(fā)現(xiàn)各處理組之間的細胞凋亡率無明顯差異。
　　8.和對照組相比，Ox-LDL組的p-JNK蛋白表達水平增