異黃酮對鎘致血管內(nèi)皮細(xì)胞不良效應(yīng)的干預(yù)作用.pdf

1、目的:用體外細(xì)胞培養(yǎng)方法觀察鎘對血管內(nèi)皮細(xì)胞的直接效應(yīng)及其作用機(jī)制,并以異黃酮進(jìn)行干預(yù).為整體研究提供依據(jù),并為鎘接觸人群的防治提供線索.方法:采用ECV 304人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株,觀察鎘與異黃酮對血管內(nèi)皮的直接作用和異黃酮對鎘的效應(yīng)的干預(yù)作用.效應(yīng)指標(biāo)包括:(1)細(xì)胞毒性:形態(tài)學(xué)觀察、細(xì)胞相對存活率、細(xì)胞膜損傷、細(xì)胞內(nèi)鎘濃度;(2)一氧化氮(NO)合成干擾:培養(yǎng)液中NO濃度、細(xì)胞內(nèi)NOS活性、細(xì)胞內(nèi)eNOS蛋白表達(dá);(3)內(nèi)皮素-1(

2、ET-1)合成干擾:培養(yǎng)液中ET-1濃度、細(xì)胞內(nèi)ECE-1a mRNA表達(dá);(4)對金屬硫蛋白(MT)合成的影響:細(xì)胞內(nèi)MT mRNA的表達(dá);(5)與雌激素受體(ER)途徑的關(guān)系:細(xì)胞內(nèi)ER mRNA和ER蛋白的表達(dá),ER拮抗劑對陽性效應(yīng)的阻斷作用.結(jié)果:鎘對內(nèi)皮細(xì)胞的不良效應(yīng):細(xì)胞內(nèi)鎘濃度隨染毒濃度的增加而升高;1~100μmol/L鎘增加內(nèi)皮細(xì)胞間隙,損傷細(xì)胞膜,抑制細(xì)胞活力并表現(xiàn)出毒物興奮效應(yīng);0.1~10μmol/L鎘減少NO量

3、,可能與抑制結(jié)構(gòu)型一氧化氮合酶(cNOS)活性有關(guān),不影響內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)的含量;上調(diào)ECE-1a表達(dá),增加ET-1的含量;上調(diào)MT基因表達(dá);上調(diào)ER基因表達(dá),不影響ER蛋白的表達(dá),ER拮抗劑不能阻斷鎘的不良效應(yīng).異黃酮對內(nèi)皮細(xì)胞的效應(yīng):異黃酮不影響細(xì)胞活力;0.1~1 μmol/L異黃酮能增強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞cNOS的活性,增加培養(yǎng)液中NO濃度,不影響eNOS蛋白的含量;1μmol/L異黃酮能增加MT mRNA的表達(dá),金雀異黃酮

4、對MT的誘導(dǎo)表達(dá)隨時間增加而增強(qiáng);不影響ER mRNA和ER蛋白的表達(dá).結(jié)論1~100μmol/L鎘破壞內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu),0.1~10 μmol/L鎘抑制NO合成,增加ET-1.鎘對血管內(nèi)皮的效應(yīng)與ER途徑無明顯關(guān)系,鎘對ER mRNA的上調(diào)其生物學(xué)意義不明.鎘及異黃酮均能誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞MT的表達(dá).異黃酮能增加鎘染毒細(xì)胞的相對存活率,可能與異黃酮上調(diào)MT mRNA表達(dá)有關(guān).異黃酮能逆轉(zhuǎn)鎘對NO和cNOS的效應(yīng).異黃酮對鎘的保護(hù)效應(yīng)與ER途徑有