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文檔簡介
1、第一部分四氯化碳致小鼠肝脂肪變性的分子機制
目的:探討四氯化碳(CCl4)促進小鼠肝細胞脂肪變性的分子機制。
方法:將6~8周齡的C57BL/6J雄性小鼠隨機分為對照組(control)(n=6)和CCl4組(CCl4)(n=6)。對照組和CCl4組分別給予皮下注射生理鹽水(NS)和CCl42周,2周后處死小鼠,留取肝臟?;瘜W酶促比色法檢測小鼠肝臟總膽固醇(TC)含量,油紅O染色觀察肝臟脂肪變程度,實時熒光定量PCR
2、和western bot檢測小鼠LDLr、SCAP和SREBP-2的基因和蛋白表達水平。
結果:CCl4組的肝組織的TC含量表達比對照組的明顯升高(P<0.05),油紅O染色顯示CCl4組肝組織可見大量的脂質堆積。CCl4組的LDLr、SREBP-2、SCAP的mRNA和蛋白表達比對照組明顯增高(P均<0.05)。
結論:CCl4可能通過上調(diào)肝細胞LDLr、SREBP-2、SCAP的表達,導致小鼠肝細胞脂質異常堆積。
3、
第二部分炎癥促進四氯化碳誘導的小鼠脂肪變肝細胞脂質集聚的相關指標變化
目的:探討炎癥促進CCl4所致的脂肪變肝細胞進一步脂質集聚形成脂肪肝的分子機制。
方法:將6~8周齡的C57BL/6J雄性小鼠隨機分為對照組(n=6)和炎癥組(n=6)。2組均預先CCl4皮下注射2周,再分別給予對照組(CCl4+NS)和炎癥組(CCl4+casein)生理鹽水(NS)和酪蛋白(casein)皮下注射16周,18周后留取
4、小鼠血清及肝組織,稱量小鼠體質量及肝質量計算肝指數(shù)評估肝臟受損情況,ELISA法檢測血清炎癥因子,酶法檢測小鼠血清脂質水平,化學酶促比色法檢測小鼠肝組織的脂質水平,油紅O染色觀察小鼠肝組織的脂質集聚情況,實時熒光定量PCR檢測小鼠SREBP-1、SREBP-2、LDLr、SCAP、HMGCR的基因表達水平,免疫組化和western blot檢測上述靶基因的蛋白表達水平。
結果:炎癥組的肝指數(shù)較對照組升高(P<0.05),炎癥組
5、的血清淀粉樣蛋白(SAA)、IL-6和TNF-α的表達均比對照組的明顯升高(P均<0.05),炎癥組的血清HDL-C、LDL-C、TC比對照組的明顯降低(P均<0.05),肝臟TC含量較對照組升高(P<0.05),HE及油紅O染色顯示炎癥組可見大量的脂質堆積。炎癥組的LDLr、SREBP-2、SCAP、SREBP-1、HMGCR的mRNA和蛋白表達比對照組明顯增高(P均<0.05)。
結論:炎癥可能通過上調(diào)肝細胞LDLr、SR
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