白芷中Shp2抑制劑的篩選.pdf

1、Shp2,是由PTPN11基因所編碼的非受體型的酪氨酸磷酸酶,它表達(dá)于機體的各種組織和細(xì)胞中。它是第一個確定的促腫瘤發(fā)生磷酸酶。因此,Shp2抑制劑的發(fā)現(xiàn)無疑會大大促進(jìn)抗癌藥物的開發(fā)。中草藥在中國已有幾千年的歷史,它具有化學(xué)成分多樣和結(jié)構(gòu)復(fù)雜雙重優(yōu)勢,所以是尋找Shp2特異性抑制劑的良好資源。
　　 首先利用GST-4B蛋白純化技術(shù),純化出了高濃度的活性蛋白酪氨酸磷酸酶PTP-Shp2(去除活性抑制區(qū)的Shp2),VHR和HeP

2、TP。隨后,利用體外高通量篩選模型,從40種植物的2000多個餾分中,篩選出了白芷的乙酸乙酯層對PTP-Shp2有明顯的特異性抑制作用。之后,對白芷的乙酸乙酯層進(jìn)行了化合物成分的分離。從白芷的乙酸乙酯層的一級餾分中篩選到六個化合物對PTP-Shp2有特異性抑制作用。最后,分離得到36個單體。在這些單體中,發(fā)現(xiàn)有六個單體在體外對PTP-Shp2有明顯的抑制作用。
　　 在細(xì)胞水平的實驗中,通過實驗驗證,在293T細(xì)胞中,只有AD-

3、A2-G5這一單體抑制EGF誘導(dǎo)的MAPK的活化,并且在人的肝癌細(xì)胞HepG2中,AD-A2-G5可以誘導(dǎo)PARP(Poly ADP-Ribose Polymerase)的切割,并且顯示出濃度和時間依賴性,同時發(fā)現(xiàn),AD-A2-G5可以濃度依賴性的激活caspase-3,-8,-9,顯示出它具有促凋亡的作用。另外還發(fā)現(xiàn),AD-A2-G5對HepG2細(xì)胞克隆的形成有抑制作用。經(jīng)結(jié)構(gòu)鑒定,AD-A2-G5為不飽和脂肪酸,所以首次發(fā)現(xiàn),除了揮