HIV融合抑制劑細(xì)胞篩選模型的建立.pdf

1、已知HIV外殼糖蛋白可在感染細(xì)胞表面表達(dá)并具有誘導(dǎo)與CD4陽(yáng)性的靶細(xì)胞融合作用(Dalgleish AG et al,1984;Klatzmann D et al,1984;Kowalski M et al,1987),于是在本論文中我們構(gòu)建了穩(wěn)定表達(dá)Env基因的細(xì)胞系,并建立在顯微鏡下篩選HIV融合抑制劑的細(xì)胞模型.我們將在Hela細(xì)胞表面表達(dá)Env基因,首先將Env基因正向插入表達(dá)載體pcDNA3的多克隆位點(diǎn)BamH1處,然后用限制

2、性內(nèi)切酶將重組質(zhì)粒線性化后通過(guò)Lipofectin轉(zhuǎn)染進(jìn)Hela細(xì)胞.Env在細(xì)胞表面的表達(dá)產(chǎn)物通過(guò)間接免疫熒光及細(xì)胞流式技術(shù)檢測(cè),并用Western Blot方法檢測(cè)表達(dá)產(chǎn)物前體gp160向gp120/gp41的加工過(guò)程.通過(guò)與CD4陽(yáng)性的T淋巴細(xì)胞-CEM共同培養(yǎng),檢測(cè)Helaenv細(xì)胞的融合性質(zhì),在顯微鏡下觀察到形成一定數(shù)量的合胞體,形狀特異,并且形成的合胞體可繼續(xù)與周?chē)鶦EM細(xì)胞發(fā)生融合.HIV融合抑制劑上市藥T20可特異性阻斷