HIV-1整合酶鏈轉(zhuǎn)移反應(yīng)抑制劑篩選模型的構(gòu)建與應(yīng)用.pdf_第1頁(yè)
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1、人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV)引起的獲得性免疫缺陷綜合征(艾滋病)是人類(lèi)歷史上最嚴(yán)重、最致命的疾病之一。艾滋病目前仍然不能治愈。HIV編碼的整合酶(IN)介導(dǎo)病毒DNA與宿主細(xì)胞基因組整合,是病毒復(fù)制所必需的關(guān)鍵酶之一,抑制IN的功能能夠有效阻斷病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制。同時(shí),由于正常人體細(xì)胞中沒(méi)有IN的功能類(lèi)似物,特異性作用于IN的抑制劑對(duì)人體的副作用可能很小,被認(rèn)為是抗HIV藥物研發(fā)的理想靶點(diǎn)。目前,IN抑制劑篩選主要以鏈轉(zhuǎn)移反應(yīng)為靶標(biāo)。

2、
　　 本研究使用Overlap PCR合成了HIV-1 HXB2CG IN的基因序列,并引入了F185K/C280S可溶性突變以提高蛋白溶解性。將目的基因連接到pET28a表達(dá)載體中,在大腸桿菌BL21中實(shí)現(xiàn)了高效且可溶性表達(dá)。通過(guò)親和層析的方法,從細(xì)胞破碎上清液中純化到重組IN蛋白。應(yīng)用文獻(xiàn)報(bào)道的高通量ELISA鑒定了重組IN蛋白的鏈轉(zhuǎn)移反應(yīng)活性,證明了重組IN蛋白具有鏈轉(zhuǎn)移反應(yīng)活性。
　　 應(yīng)用三個(gè)參數(shù)評(píng)價(jià)并證明了

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