基于HIV假病毒的細胞水平的整合酶抑制劑篩選模型的建立.pdf

1、自1981年發(fā)現(xiàn)第一例艾滋病后，艾滋病在全球范圍內(nèi)不斷蔓延，防艾形勢十分嚴峻。目前，治療艾滋病主要采用高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法(highly activeantiretroviral therapy，HAART)。HAART在很大程度上抑制了HIV-1的復制，延緩了艾滋病的疾病進程，提高了艾滋病人的生活質(zhì)量。但是，HIV-1耐藥毒株的不斷出現(xiàn)和抗HIV-1藥物嚴重的毒副作用的存在，使人們不得不尋找新的HIV-1抑制劑。其中，整合酶抑制劑是一

2、類很有開發(fā)前景的藥物。
　　 合適的藥物篩選方法是進行藥物研發(fā)的基礎和關鍵。目前，HIV-1抑制劑的篩選方法主要有體內(nèi)和體外篩選方法。體內(nèi)篩選方法采用動物模型，周期長、價格昂貴，因此應用的并不普遍。目前，主要以體外篩選方法為主。體外篩選方法又分為分子水平的篩選方法和細胞水平的篩選方法。分子水平的篩選方法主要以病毒復制過程中特定的功能性活動或特定結(jié)構(gòu)作為靶點，不能用活細胞或病毒來直接評價藥物對靶標的作用效果，因此相對于細胞水平的篩

3、選方法，其實驗結(jié)果可靠性較小，不能真實反映其在細胞內(nèi)的作用效果。細胞水平的篩選方法是在活細胞內(nèi)檢測藥物的抗病毒效果，結(jié)果更加可靠、穩(wěn)定。
　　 本文在實驗室前期工作的基礎上，建立了一套完整的基于HIV-1假病毒的細胞水平的HIV-1抑制劑的高通量篩選模型，利用該模型對419種小分子化合物進行了檢測，篩選到了17種明顯抑制HIV-1復制的化合物、12種較明顯抑制HIV-1感染活性的化合物，并通過HIV-1感染細胞后不同時間加藥實驗

4、結(jié)合Alu-LTR PCR和2-LTR PCR技術進一步對它們的作用靶點進行了分析，確定了這些化合物以HIV-1生活周期中的整合環(huán)節(jié)為靶標，屬于整合酶抑制劑。
　　 本文建立的基于HIV-1假病毒的細胞水平的整合酶抑制劑的初步篩選模型對HIV-1整合酶抑制劑的研發(fā)、篩選具有重要價值，該模型可快速、簡便地對待測化合物進行檢測，檢測結(jié)果對HIV-1整合酶抑制劑的研發(fā)具有重要的指導意義，根據(jù)分析檢測結(jié)果得到的信息，可不斷優(yōu)化化合物的結(jié)