人單核巨噬細(xì)胞泡沫化抑制劑篩選模型的建立及初步應(yīng)用.pdf

1、在血漿脂蛋白中,變性的低密度脂蛋白(modified low density lipoprotein,mLDL)被公認(rèn)為是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)的危險(xiǎn)因子,巨噬細(xì)胞通過(guò)其表面的A類(lèi)清道夫受體(scavenger receptor classA,SR-A),可以無(wú)限制地?cái)z取mLDL,如氧化的低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)、乙?；牡兔芏戎鞍?/p>

2、(acetylated low density lipoprotein,ac-LDL)等,導(dǎo)致膽固醇在細(xì)胞中異常蓄積,并使其自身泡沫化,而形成AS病灶,所以細(xì)胞泡沫化可作為AS的特征性標(biāo)志<'[1]>.基于以上原理本實(shí)驗(yàn)在體外用人單核細(xì)胞株U937為細(xì)胞材料,利用佛波酯將其誘導(dǎo)為單核巨噬細(xì)胞,根據(jù)單核巨噬細(xì)胞細(xì)胞膜上的SR-A可大量攝取ox-LDL的特點(diǎn),以ox-LDL作為配基,建立人單核巨噬細(xì)胞泡沫化模型,旨在尋找具有作用于巨噬細(xì)胞泡

3、沫化過(guò)程的抗動(dòng)脈粥樣硬化的先導(dǎo)化合物或候選藥物.將U937單核細(xì)胞經(jīng)佛波酯(PMA)誘導(dǎo),使其分化為巨噬細(xì)胞后,每孔加入12 μ g氧化的低密度脂蛋白(ox-LDL),37℃培養(yǎng)48小時(shí),建成單核巨噬細(xì)胞泡沫化模型,利用油紅0染色、顯微鏡下觀察細(xì)胞泡沫化的情況.以基因工程技術(shù)表達(dá)的人清道夫受體A類(lèi)Ⅱ型(SR-AII)的胞外可溶性部分作為樣品,加入到泡沫細(xì)胞模型中,理論上認(rèn)為它可通過(guò)與巨噬細(xì)胞表面的SR-A競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合ox-LDL而有效地阻斷

4、或抑制巨噬細(xì)胞攝取ox-LDL,從而抑制泡沫細(xì)胞的形成.實(shí)驗(yàn)結(jié)果恰好驗(yàn)證了這一推測(cè),也進(jìn)一步驗(yàn)證了U937單核巨噬細(xì)胞表面確實(shí)有大量的SR-A表達(dá),并且此受體在泡沫細(xì)胞形成過(guò)程中發(fā)揮了主要作用.應(yīng)用建立的模型從2600個(gè)微生物次級(jí)代謝產(chǎn)物中篩選出有抑制細(xì)胞泡沫化活性的陽(yáng)性發(fā)酵液8個(gè),并對(duì)它們進(jìn)行了抗菌活性研究,對(duì)重點(diǎn)陽(yáng)性菌株2495進(jìn)行了生物學(xué)鑒定、發(fā)酵條件摸索和發(fā)酵液活性成分性質(zhì)的初步研究.篩選了84個(gè)化合物發(fā)現(xiàn)5個(gè)陽(yáng)性化合物,其中化