HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑篩選方法的研究.pdf

1、逆轉(zhuǎn)錄酶在人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV)的生命周期中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，成為目前最成功的獲得性免疫缺陷綜合癥(AIDS)的治療靶點(diǎn)之一，逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑在AIDS治療中必不可少?，F(xiàn)有藥物的副作用和耐藥性的快速出現(xiàn)使得尋找新HIV逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的研究工作更為緊迫。天然產(chǎn)物是新藥的重要來(lái)源，如能對(duì)天然產(chǎn)物粗提物進(jìn)行HIV逆轉(zhuǎn)錄酶抑制活性篩選將極大地提高發(fā)現(xiàn)新HIV逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的效率。因此，本文以發(fā)展可用于天然產(chǎn)物粗提物的HIV逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑的

2、篩選方法為目標(biāo)進(jìn)行了研究。 首先，創(chuàng)新性地將異相免疫分析、時(shí)間分辨熒光檢測(cè)與HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶催化的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)相結(jié)合，構(gòu)建了新的HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶活性檢測(cè)方法。這一方法借助digoxigenin和抗digoxigenin抗體進(jìn)行捕獲，可以有效避免天然產(chǎn)物粗提物中內(nèi)源性生物素帶來(lái)的干擾；檢測(cè)中使用的異相時(shí)間分辨熒光技術(shù)可以有效避免天然產(chǎn)物粗提物自身對(duì)檢測(cè)準(zhǔn)確性帶來(lái)的干擾。實(shí)驗(yàn)證實(shí)了其可行性。 其次，對(duì)一些重要的影響因素進(jìn)行

3、優(yōu)化，并對(duì)優(yōu)化后的方法進(jìn)行了評(píng)價(jià)。研究表明，新方法簡(jiǎn)便、快速，可以準(zhǔn)確定量檢測(cè)HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶活性，靈敏度高，重復(fù)性好，證實(shí)所開(kāi)發(fā)的方法能有效避免天然產(chǎn)物粗提物中內(nèi)源性生物素帶來(lái)的干擾，準(zhǔn)確檢測(cè)純物質(zhì)和天然產(chǎn)物粗提物的HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶抑制活性，而且可用于分離提取時(shí)的活性跟蹤。 最后，將該方法用于海綿天然產(chǎn)物的研究。結(jié)果表明，該方法可以評(píng)估海洋生物粗提物的HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶抑制活性，可以用于分離前后的活性跟蹤，并進(jìn)而指導(dǎo)下一步