一個全新HIV融合抑制劑的設計及其體外阻斷HIV-1感染的應用.pdf

1、艾滋病(AIDS)是由人類免疫缺陷病毒(HIV)感染引起的一種嚴重威脅人類生命健康的疾病。目前在全球已呈爆發(fā)性流行趨勢，其主要傳播形式是未保護的性接觸，超過90％的感染由此引起。鑒于安全套的使用在大多數(shù)情況下無法保證，開發(fā)有效的殺微生物劑來預防HIV的性接觸傳播是目前全球艾滋病預防的首要任務和重要課題。 最近幾年，有關HIV-1病毒和細胞膜融合導致病毒基因組進入宿主細胞的分子過程已逐漸被闡明。這些對病毒進入機制的研究使得干涉病毒

2、進入的治療和預防成為可能。阻斷這一病毒生命周期中重要的環(huán)節(jié)，將可能有效控制HIV的傳播與繁殖，是目前開發(fā)殺微生物劑的主要策略。 本文將介紹一個全新的HIV融合抑制劑的研究開發(fā)工作： (1) 運用生物信息學揭示HIV-1膜蛋白gp41N端和C端結構域的結構與功能關系，并根據(jù)gp41蛋白的三維晶體結構，采用分子設計技術和定點突變技術，以C34為突變起始多肽，設計出含34個氨基酸的多肽FB006，目的是增加藥物溶解度和抗病毒活

3、性。計算機模擬分析顯示，F(xiàn)B006在親水性和α-螺旋傾向上比C34增強。 (2) 用標準固相Fmoc多肽合成法合成FB006。采用反相高效液相色譜分離提純粗肽并檢測，其純度可達95％以上；采用液質(zhì)聯(lián)用質(zhì)譜儀測定分子量為4368.1道爾頓；其在pH7.4 20mM的PBS中25oC的溶解度為12.8 mg/ml，比C34提高約2倍。 (3) 在pH7.4、6.0、3.0下進行90天pH穩(wěn)定性研究，結果表明FB006在pH6

4、.0時最穩(wěn)定，可在溶液中連續(xù)22天保留穩(wěn)定，降解少于5％。不同溫度下的穩(wěn)定性測定表明，室溫(25℃)下和37℃下試驗FB006溶液穩(wěn)定達14天，降解少于5％。 (4) 體外評價FB006對多個HIV-1亞型的抗病毒活性和阻止細胞介導的HIV-1感染，及其對CCR5和CXCR4不同輔助受體的敏感性，F(xiàn)B006顯示了顯著的抗HIV-1活性。 (5) 研究FB006抗病毒活性機制，應用CD4-LTR/gal報告基因系統(tǒng)測試表明

5、FB006強效阻斷HIV-1與人體免疫細胞的附著和融合，確認其為HIV融合抑制劑。 (6) 安全性評價檢查了FB006對人體細胞毒性，包括人類外周血單核細胞、巨噬細胞，乳桿菌，人類精子和陰道上皮細胞；進行了小鼠全身系統(tǒng)性毒性檢測，以及家兔陰道粘膜局部刺激檢測。所有研究中，極小或幾乎沒有觀察到副反應。 以上結果提示，F(xiàn)B006是一個安全、有效的抗HIV-1殺微生物劑候選分子，應進一步加大開發(fā)力度，早日進入臨床開發(fā)和投放市場