一個(gè)全新HIV融合抑制劑的設(shè)計(jì)及其體外阻斷HIV-1感染的應(yīng)用.pdf

1、艾滋病(AIDS)是由人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV)感染引起的一種嚴(yán)重威脅人類(lèi)生命健康的疾病。目前在全球已呈爆發(fā)性流行趨勢(shì)，其主要傳播形式是未保護(hù)的性接觸，超過(guò)90％的感染由此引起。鑒于安全套的使用在大多數(shù)情況下無(wú)法保證，開(kāi)發(fā)有效的殺微生物劑來(lái)預(yù)防HIV的性接觸傳播是目前全球艾滋病預(yù)防的首要任務(wù)和重要課題。 最近幾年，有關(guān)HIV-1病毒和細(xì)胞膜融合導(dǎo)致病毒基因組進(jìn)入宿主細(xì)胞的分子過(guò)程已逐漸被闡明。這些對(duì)病毒進(jìn)入機(jī)制的研究使得干涉病毒

2、進(jìn)入的治療和預(yù)防成為可能。阻斷這一病毒生命周期中重要的環(huán)節(jié)，將可能有效控制HIV的傳播與繁殖，是目前開(kāi)發(fā)殺微生物劑的主要策略。 本文將介紹一個(gè)全新的HIV融合抑制劑的研究開(kāi)發(fā)工作： (1) 運(yùn)用生物信息學(xué)揭示HIV-1膜蛋白gp41N端和C端結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系，并根據(jù)gp41蛋白的三維晶體結(jié)構(gòu)，采用分子設(shè)計(jì)技術(shù)和定點(diǎn)突變技術(shù)，以C34為突變起始多肽，設(shè)計(jì)出含34個(gè)氨基酸的多肽FB006，目的是增加藥物溶解度和抗病毒活

3、性。計(jì)算機(jī)模擬分析顯示，F(xiàn)B006在親水性和α-螺旋傾向上比C34增強(qiáng)。 (2) 用標(biāo)準(zhǔn)固相Fmoc多肽合成法合成FB006。采用反相高效液相色譜分離提純粗肽并檢測(cè)，其純度可達(dá)95％以上；采用液質(zhì)聯(lián)用質(zhì)譜儀測(cè)定分子量為4368.1道爾頓；其在pH7.4 20mM的PBS中25oC的溶解度為12.8 mg/ml，比C34提高約2倍。 (3) 在pH7.4、6.0、3.0下進(jìn)行90天pH穩(wěn)定性研究，結(jié)果表明FB006在pH6

4、.0時(shí)最穩(wěn)定，可在溶液中連續(xù)22天保留穩(wěn)定，降解少于5％。不同溫度下的穩(wěn)定性測(cè)定表明，室溫(25℃)下和37℃下試驗(yàn)FB006溶液穩(wěn)定達(dá)14天，降解少于5％。 (4) 體外評(píng)價(jià)FB006對(duì)多個(gè)HIV-1亞型的抗病毒活性和阻止細(xì)胞介導(dǎo)的HIV-1感染，及其對(duì)CCR5和CXCR4不同輔助受體的敏感性，F(xiàn)B006顯示了顯著的抗HIV-1活性。 (5) 研究FB006抗病毒活性機(jī)制，應(yīng)用CD4-LTR/gal報(bào)告基因系統(tǒng)測(cè)試表明

5、FB006強(qiáng)效阻斷HIV-1與人體免疫細(xì)胞的附著和融合，確認(rèn)其為HIV融合抑制劑。 (6) 安全性評(píng)價(jià)檢查了FB006對(duì)人體細(xì)胞毒性，包括人類(lèi)外周血單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞，乳桿菌，人類(lèi)精子和陰道上皮細(xì)胞；進(jìn)行了小鼠全身系統(tǒng)性毒性檢測(cè)，以及家兔陰道粘膜局部刺激檢測(cè)。所有研究中，極小或幾乎沒(méi)有觀察到副反應(yīng)。 以上結(jié)果提示，F(xiàn)B006是一個(gè)安全、有效的抗HIV-1殺微生物劑候選分子，應(yīng)進(jìn)一步加大開(kāi)發(fā)力度，早日進(jìn)入臨床開(kāi)發(fā)和投放市場(chǎng)