SHP2調(diào)控少突膠質(zhì)細(xì)胞分化研究.pdf

1、多發(fā)性硬化癥(MS)患者中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)髓鞘表現(xiàn)為進(jìn)行性缺失，損傷的髓鞘無(wú)法再生。髓鞘的形成包括一系列的過(guò)程：干細(xì)胞定向分化為少突膠質(zhì)前體細(xì)胞(OPCs)、OPCs增殖、遷移、分化成熟，進(jìn)而包繞軸突，緊縮形成髓鞘。OPCs分化是髓鞘再生過(guò)程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一，最新觀點(diǎn)認(rèn)為，OPCs分化受阻是髓鞘難以再生的主要原因之一。然而，OPCs分化的相關(guān)調(diào)節(jié)機(jī)制尚不十分清楚。
　　 OLs的分化受到很多生長(zhǎng)因子的調(diào)節(jié)，如CNTF、NT3

2、和ErBb2等。生長(zhǎng)因子作用于OLs要通過(guò)下游信號(hào)傳導(dǎo)完成，信號(hào)分子磷酸化是這些信號(hào)傳導(dǎo)中的主要事件。已有研究表明，PI3K/Akt，F(xiàn)yn/Rho，MAPK等分子磷酸化在OLs細(xì)胞分化和髓鞘形成過(guò)程中發(fā)揮重要作用。細(xì)胞內(nèi)信號(hào)分子磷酸化水平受磷酸激酶和磷酸酶的共同調(diào)節(jié)，目前，有關(guān)磷酸激酶與髓鞘化之間的關(guān)系已成熱點(diǎn)，但磷酸酶與髓鞘化之間的研究還很少。
　　 釩酸鈉(SOV)，是一種磷酸酶的廣譜抑制劑，可以廣泛地抑制磷酸酶活性，可以

3、通過(guò)抑制酪氨酸位點(diǎn)的去磷酸化上調(diào)酪氨酸激酶相關(guān)生長(zhǎng)因子受體信號(hào)。SHP2是一種胞漿的非受體型酪氨酸磷酸酶，廣泛表達(dá)于神經(jīng)系統(tǒng)。研究發(fā)現(xiàn)，SHP2敲除后神經(jīng)干細(xì)胞分化為少突膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量顯著減少，SHP2在腦缺血性損傷后的表達(dá)顯著增加。然而，SHP2是否參與調(diào)節(jié)OLs細(xì)胞分化尚無(wú)報(bào)道。
　　 本研究包括五個(gè)部分：1.通過(guò)SOV喂服E18孕大鼠，給予圍產(chǎn)期大鼠SOV處理，免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)新生第7天(P7)SD大鼠腦內(nèi)胼胝體區(qū)MB

4、P表達(dá)水平，觀察到MBP信號(hào)明顯減少；2.體外培養(yǎng)純化OPCs，加入不同濃度的SOV處理，發(fā)現(xiàn)25μM及以上濃度均可顯著抑制OLs分化；3.采用酪氨酸磷酸酶特異性抑制劑(PTP inhibitorⅣ)處理，發(fā)現(xiàn)2μM濃度以上顯著抑制OLs細(xì)胞分化；4.體外培養(yǎng)純化OPCs，檢測(cè)到SHP2在少突膠質(zhì)細(xì)胞的前體和成熟階段均有表達(dá)。免疫組織化學(xué)染色，進(jìn)一步確證SHP2在大鼠腦內(nèi)少突膠質(zhì)細(xì)胞系中存在表達(dá)；5.應(yīng)用RNA i干擾、過(guò)表達(dá)方法轉(zhuǎn)染O