天然植物中胰脂肪酶抑制劑的篩選.pdf

1、肥胖已經(jīng)嚴重危害到人類的健康，被WHO明確認定為全球最大慢性疾病。每年至少有340萬人死于超重和肥胖。面對如此嚴峻的形勢，在過去幾十年中，研究人員對肥胖的治療進行了大量研究，結果表明通過藥物抑制胰脂肪酶(Pancreatic lipase, PL)活性，阻止脂肪水解吸收成為治療肥胖最有效的方法之一，此類藥物僅有奧利司他，但該藥物仍有明顯的副作用，因而開發(fā)出安全，無毒副作用，可長期服用的PL抑制劑類減肥藥物成為研究的熱點。當前，從資源豐富

2、的天然產(chǎn)物中篩選PL抑制劑是最有效的手段之一，但利用傳統(tǒng)篩選方法進行篩選存在許多的缺點，因此人們研究出了利用固定化酶從天然植物中篩選能與之進行特異性結合的化合物的方法，該方法克服了傳統(tǒng)篩選方法的缺陷，減少了天然產(chǎn)物分離和活性篩選的盲目性，節(jié)省了時間，極大地提高了篩選的命中率。
　　本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)連翹葉提取物對PL有較好的抑制作用，體內(nèi)實驗證明其具有減輕肥胖大鼠體重，降低總脂含量和血清中甘油三酯的作用，但有效成分還不確定。本論

3、文在前期實驗研究的基礎上，首先合成了磁珠固定化胰脂肪酶，然后利用固定化酶對連翹葉中的PL抑制劑進行了系統(tǒng)篩選，最后又對其它幾種天然植物抑酶作用進行了初步研究。主要研究內(nèi)容和結果如下：
　　1.以羧基磁珠為載體，通過磁珠上羧基與PL上氨基共價結合形成酰胺鍵而合成了固定化酶，并利用紅外光譜進行了結構表征，然后利用陽性抑制劑橙皮苷對建立的固定化酶篩選模型進行了驗證。結果表明橙皮苷可以特異性結合到固定化酶上，說明所建立的固定化酶篩選模型可

4、用于篩選天然植物提取物中能與PL發(fā)生特異性結合的化合物。
　　2.以95％乙醇提取連翹葉，并用石油醚萃取法去除葉綠素，然后進行系統(tǒng)萃取，最后測定了各萃取組分對PL的抑制作用。結果顯示剩余沉淀組分對PL抑制作用最好，1.5 mg/mL時抑制率為81.48%，因此選用該組分作為連翹葉進行固定化酶篩選的樣品。此外，還發(fā)現(xiàn)了利用濁點萃取法結合超聲波可高效提取葉綠素的新方法。
　　3.利用固定化酶篩選模型對連翹葉最高抑酶活性組分中的P

5、L抑制劑進行了系統(tǒng)篩選，并對篩選出的化合物進行了結構鑒定和抑酶作用測定。最終篩選出9個與PL有作用的化合物，包括3個黃酮類(蘆丁、橙皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷)、2個多酚類(綠原酸、咖啡酸)、2個木脂素類(連翹苷、牛蒡子苷元)及2個苯乙醇類(連翹酯苷A及其同分異構體)。在確定結構的8個化合物中，連翹苷對PL有促進作用，其余均為抑制作用，其中山奈酚-3-O-蕓香糖苷抑酶作用最好(IC50：2.9±0.5μmol/L)。抑制類型有競爭性