復合載體固定化酶親和色譜篩選脂肪酶抑制劑的研究.pdf

1、親和色譜(Affinity chromatography)是一種基于生物活性分子與生物大分子間特異性相互作用的分離技術。該技術可有效分離純化具有生物活性的物質(zhì),已廣泛應用于藥物篩選和藥靶鑒別等領域。脂肪在體內(nèi)被脂肪酶水解成甘油和脂肪酸,然后被人體吸收。因此,脂肪酶是影響脂肪代謝的關鍵酶,降低其活性,可有效控制人體對脂肪的攝入。目前,脂肪酶抑制劑作為有效的體重控制及減肥藥物已得到高度關注。本論文針對從中藥及天然產(chǎn)物中脂肪酶抑制劑的快速、高

2、效篩選問題,對篩選方法、脂肪酶固載及應用進行了研究。
　　 論文主要工作如下:
　　 1、建立了從中藥山楂中篩選脂肪酶抑制劑的氣相色譜法,并探討了山楂提取物對脂肪酶的抑制活性及機理。以三丁酸甘油酯為底物,采用豬胰脂肪酶抑制劑活性篩選模型對各組分進行篩選。Dixon圖和Lineweaver-Burk圖表明山楂提取物對胰脂肪酶的抑制作用為非競爭性抑制,Ki=0.91 g/L。用水、乙醇、氯仿、乙酸乙酯作為提取劑提取的山楂提取

3、物的IC50分別為17.44 mg/mL、7.0 mg/mL、2.91 mg/mL、1.31 mg/mL,表明山楂的乙酸乙酯提取物對脂肪酶的抑制活性最高。
　　 2、以硅膠負載殼聚糖為載體,通過共價結(jié)合的方法將脂肪酶固定在復合載體上,克服了純殼聚糖作為基質(zhì)時存在的酸溶、質(zhì)軟、成形難和純硅膠非特異性吸附強的缺點。優(yōu)化了硅膠與殼聚糖固定脂肪酶的最佳比例、戊二醛交聯(lián)濃度、固定化時間等。對固定化酶的性質(zhì)研究表明該固定化脂肪酶在pH適用范