中草藥中乙醇脫氫酶抑制劑的靶向篩選與分離.pdf

1、乙醇脫氫酶(ADH)是參與乙醇在體內(nèi)代謝的主要酶。ADH抑制劑可以通過抑制ADH的活性，達(dá)到緩解酒精中毒的目的，也是目前臨床上使用的毒性醇中毒解毒藥物。目前現(xiàn)有的ADH抑制劑價(jià)格昂貴且副作用多。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，天然的活性物質(zhì)作為藥物時(shí)副作用更小，安全性更高，更符合患者對(duì)綠色天然的健康需求。然而天然產(chǎn)物種類繁多、成分復(fù)雜、有效成分含量低，傳統(tǒng)的天然產(chǎn)物活性成分篩選方法費(fèi)時(shí)、費(fèi)力而且效率低下。天然產(chǎn)物復(fù)雜體系中活性物質(zhì)的快速篩選與分離也一

2、直是中草藥研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)問題。近年來，在快速篩選活性物質(zhì)的新方法中，基于生物親和作用的靶向篩選引起了研究者的關(guān)注。本論文針對(duì)中草藥中ADH抑制劑的靶向篩選和分離開展研究。主要研究工作如下:
　　1.制備了Fe3O4@SiO2磁性納米粒子，并以該納米粒子為載體、戊二醛為交聯(lián)劑對(duì)ADH進(jìn)行固定化。測(cè)定了固定化酶中ADH的負(fù)載量。探討了溫度和pH對(duì)固定化ADH和游離ADH活性的影響。結(jié)果顯示ADH被固定化后，酶的熱穩(wěn)定性和pH穩(wěn)定性均

3、比游離ADH有所增強(qiáng)，并且固定化ADH有很好的重復(fù)利用性和穩(wěn)定性。采用Fe3O4@SiO2-ADH磁性納米粒子靶向篩選甘草中的ADH抑制劑，考察并優(yōu)化了篩選條件，結(jié)果篩選得到9個(gè)ADH抑制劑，其中7個(gè)物質(zhì)是首次被篩選出的具有ADH抑制活性的物質(zhì)。
　　2.構(gòu)建了超過濾結(jié)合高速逆流色譜靶向篩選和分離甘草中ADH抑制劑的新方法。考察并優(yōu)化了酶濃度、孵育時(shí)間、pH和溫度等超過濾條件對(duì)篩選的影響。在最優(yōu)條件下對(duì)甘草提取液進(jìn)行ADH抑制劑的

4、篩選，最終發(fā)現(xiàn)3個(gè)活性化合物具有抑制作用。結(jié)合高速逆流色譜對(duì)這些活性化合物進(jìn)行分離，溶劑體系為乙酸乙酯-甲醇-水(5∶4∶1)。通過對(duì)分離得到的化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，這3個(gè)化合物分別為甘草苷、異甘草苷和甘草素。其中異甘草苷的ADH抑制活性最強(qiáng)，其IC50為8.95μM。
　　3.研究建立了超過濾結(jié)合高效液相色譜靶向篩選廣金錢草中ADH抑制劑的方法?？疾靸?yōu)化了酶濃度、孵育時(shí)間、pH和溫度對(duì)篩選的影響。在最優(yōu)條件下采用超過濾對(duì)廣金錢草提