乳酸脫氫酶高產(chǎn)菌株的篩選及其酶的分離純化.pdf

1、乳酸脫氫酶(LDH)催化丙酮酸和乳酸的可逆轉(zhuǎn)化，是生物體內(nèi)糖酵解過程中重要的氧化還原酶。有關(guān)乳酸脫氫酶的研究工作已經(jīng)相當(dāng)廣泛，但是枯草芽孢桿菌的乳酸脫氫酶少有研究?？莶菅挎邨U菌自身沒有致病性，只具有單層細胞外膜，能直接將許多蛋白分泌到培養(yǎng)基中。作為革蘭氏陽性細菌的典型代表，對于其生理、生化、遺傳及分子生物學(xué)的研究已有40多年的歷史。本論文對枯草芽孢桿菌乳酸脫氫酶的篩選純化和酶學(xué)性質(zhì)進行研究，為開發(fā)食品源枯草芽孢桿菌的乳酸脫氫酶奠定基礎(chǔ)。

2、
　　 通過廣泛篩選食品、枯草及土壤等樣品中的芽孢桿菌，獲得一株乳酸脫氫酶的高產(chǎn)菌株，經(jīng)過鑒定確證為枯草芽孢桿菌；研究了該菌株的LDH的分離純化方法，同時對其酶學(xué)性質(zhì)進行了研究。
　　 1.從樣品中篩選出LDH活性高的1個菌株，編號為BJ07，經(jīng)鑒定為枯草芽孢桿菌。
　　 2.對BJ07乳酸脫氫酶的分離純化條件進行優(yōu)化，通過發(fā)酵液的離心分離，細胞破碎、透析、40％硫酸銨沉淀、Sephadex-G75凝膠過濾層析及

3、DEAE-Sepharose(DE-52)離子交換層析等純化步驟，分離的乳酸脫氫酶經(jīng)SDS-PAGE電泳檢測為單一蛋白條帶，最終純化倍數(shù)為25.7，酶活回收率為10.7％，該酶的分子量為28.4kDa。
　　 3.研究分離純化得到的乳酸脫氫酶的性質(zhì)，得出該酶的最適反應(yīng)溫度為45℃，在35℃比較穩(wěn)定，最適反應(yīng)pH值為7.5。
　　 4.研究了BJ07產(chǎn)酶的最適條件，結(jié)果為培養(yǎng)時間60h、培養(yǎng)溫度31℃，培養(yǎng)液以1.O％的尿