天然產(chǎn)物中EV71-3C蛋白酶抑制劑的篩選.pdf

1、EV71-3C蛋白酶在病毒蛋白加工過(guò)程中，水解除了VP1、2A、VP2和VP4之外的所有多聚蛋白;還切割許多調(diào)控因子，如轉(zhuǎn)錄激活因子p53和TATA-box結(jié)合蛋白(TBP)等;所以，EV71-3C蛋白酶有望作為蛋白靶點(diǎn)進(jìn)行藥物開(kāi)發(fā)。
　　本文以EV71-3C蛋白酶為靶點(diǎn)，運(yùn)用高通量篩選方法從天然產(chǎn)物中篩選其抑制劑。首先，對(duì)現(xiàn)有天然產(chǎn)物庫(kù)和中藥材及其飲片的初步提取分離組分進(jìn)行篩選，選出抑制效果較好的藥材。經(jīng)過(guò)初步篩選，得到5種活性

2、較好的藥材:穿心蓮、魚(yú)腥草、蘇葉、黃柏、荊芥。經(jīng)95％乙醇提取后，利用硅膠柱色譜、凝膠柱色譜、大孔樹(shù)脂色譜、聚酰胺色譜、Combiflash快速分離色譜及高效液相色譜法、重結(jié)晶等技術(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)室儲(chǔ)備的中草藥浸膏和中藥飲片進(jìn)行提取、分離、純化，獲得標(biāo)準(zhǔn)組分（成分約為10-20種）或單體增補(bǔ)到天然產(chǎn)物庫(kù)中。然后基于3C蛋白酶的體外高通量酶活篩選體系進(jìn)行活性檢測(cè)。并且借助1H-NMR、13C-NMR、MS、DEPT和2D-NMR等波譜法鑒定分離得

3、到的化合物結(jié)構(gòu)。
　　從這5種藥材中，共分離得到35個(gè)單體化合物，鑒定了其中20個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)，分別為:從穿心蓮中分離出穿心蓮內(nèi)酯、油酸、14-去氧-11，12-二去氫穿心蓮內(nèi)酯、β-谷甾醇&5-羥基-7，8，2'，6'-四甲氧基黃酮、5-羥基-7，8-二甲氧基黃酮、5-羥基-7，8-二甲氧基二氫黃酮、棕櫚酸等;從魚(yú)腥草中分離出槲皮苷、β-谷甾醇、金絲桃苷、月桂酸等;從蘇葉中分離出異虎耳草素、熊果酸（又名烏索酸）、紫蘇酮、β-谷甾