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文檔簡介
1、目的:AMACR是一種胞漿蛋白,主要存在于人類過氧化物酶體和線粒體中,參與側鏈脂肪酸及脂肪酸衍生物的β氧化和在膽酸代謝中間產物的氧化過程中發(fā)揮重要作用,它的高表達對腫瘤的增殖具有積極的促進作用,但這一結論在肝癌中尚未被證實。本課題組將采用無標記定量蛋白質組學技術分析過表達AMACR對肝癌細胞增殖的作用機制。
方法:應用AMACR過表達的慢病毒載體對肝癌細胞株HepG2進行轉導,建立AMACR穩(wěn)定過表達細胞株,通過CCK-8試驗
2、檢測過表達AMACR對肝癌細胞增殖的影響。然后提取 AMACR過表達細胞株全蛋白,進行無標記定量蛋白質組學研究。對鑒定結果用統(tǒng)計學方法篩選出差異表達蛋白,并對其進行生物信息學分析和利用熒光定量PCR方法對結果進行驗證。
結果:成功構建了AMACR過表達肝癌細胞株,CCK-8試驗結果顯示過表達 AMACR能夠促進肝癌細胞的增殖。應用無標記定量蛋白質組學方法,共篩選出138個差異表達蛋白,其中上調蛋白124個,下調蛋白14個。這些
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