肝星狀細胞通過AKT信號通路促進小鼠肝癌細胞增殖.pdf

1、背景目的：原發(fā)性肝細胞癌(Hepatocellularcarcinoma，HCC)作為一個世界性的醫(yī)學難題，正以其高發(fā)病率、高轉移侵襲力和高病死率時時刻刻威脅著人類健康。原發(fā)性肝細胞癌位居難治性惡性腫瘤前五，肝細胞癌發(fā)病率正逐年升高。肝癌微環(huán)境作為腫瘤免疫治療的新方向，正逐漸走入人們的視野，在癌癥發(fā)生發(fā)展中，肝癌微環(huán)境起了重要作用，通過采用各種手段影響肝癌微環(huán)境達到抑制肝癌發(fā)生發(fā)展的目的為原發(fā)性肝細胞癌的治療提供了新的思路。越來越多的證

2、據(jù)顯示HCC的發(fā)生發(fā)展與其所處的肝癌微環(huán)境有著緊密聯(lián)系。肝星狀細胞(Hepaticstellatecells，HSCs)是間質細胞的一種，廣泛存在于人體肝臟組織中，其在肝臟受到病理因素侵襲時會發(fā)生活化，參與各種病理過程，同時也參與組成肝癌的微環(huán)境，影響細胞外基質的代謝，與原發(fā)性肝癌的發(fā)生和進展密切相關。本實驗旨在探討活化肝星狀細胞在體內實驗和體外實驗中對肝癌細胞增殖的影響及其產生作用的機制，為后續(xù)繼續(xù)探討HSCs在生物學、免疫學相關領域

3、的作用，以及以HSCs為靶標的肝癌治療方法提供實驗及理論基礎。
　　實驗方法：選取生長情況相同的BALB/c雄性小鼠，并將其隨機分為兩組，并在兩組小鼠肝包膜下分別注射小鼠肝癌細胞H22及H22+HSCs，構建小鼠原位肝癌移植模型，10天后處死荷瘤小鼠，收集對照組小鼠和共移植組小鼠的肝臟腫瘤組織。通過Westernblot技術檢測兩組小鼠腫瘤組織中ERK、AKT信號通路的表達情況。收集所培養(yǎng)的小鼠肝星狀細胞的上清液，過濾純化后制成條

4、件培養(yǎng)基(Conditionedmedia，CM)，在體外實驗中檢測HSCs對H22細胞增殖的影響及其與AKT信號通路之間的關系，并使用另一種小鼠成纖維細胞NIH3T3作為對照，最后，我們將用2種CM處理過的H22細胞分別接種到BALB/c雄性小鼠皮下，觀察皮下腫瘤的生長情況。
　　結果：我們在小鼠體內肝癌模型中穩(wěn)定的模擬了HSCs在體內對HCC的影響;在體內、體外實驗中證實了接受HSCs處理的H22細胞的增殖能力均明顯提高，差異

5、具有統(tǒng)計學意義;同時，HSCs處理后的H22細胞AKT信號通路下游蛋白β-catenin-CyclinD2和GSK3β-CyclinD1的表達明顯升高，在加入AKT信號通路特異性阻斷藥物LY294002后，H22細胞的AKT信號通路相關蛋白的表達與增殖能力均受到明顯抑制。
　　結論：在體內外實驗中證明，HSCs均能通過激活H22細胞AKT信號通路的方式促進H22細胞增殖;這種激活能力具有一定的特異性，這對于后續(xù)開展HSCs相關研究