鎘通過GPER1-ERK-AKT-NF-κB通路促進(jìn)甲狀腺癌細(xì)胞增殖.pdf

1、目的:研究鎘促進(jìn)甲狀腺癌WRO和FRO細(xì)胞增殖的分子機(jī)制及G蛋白偶聯(lián)雌激素受體1（GPER1/GPR30）在其中的作用。
　　方法：Western blot檢測(cè)MCF-7、WRO及FRO三種細(xì)胞系GPER1的表達(dá)；將WRO和FRO細(xì)胞分別分為7組進(jìn)行處理：空白對(duì)照組、鎘（Cd）（250、500、750及1000 nM）處理組、17β-雌二醇（E2）（10 nM）處理組和GPER1特異性激動(dòng)劑（G1）（10 nM）處理組， MTT法

2、檢測(cè)細(xì)胞增殖；將WRO和FRO細(xì)胞分別分組并進(jìn)行處理：（1）空白對(duì)照組、Cd（5、10、15及30 min）處理組、E2（15 min）處理組和G1（15 min）處理組；（2）空白對(duì)照組、Cd（1、3、6及12 h）處理組、E2（12 h）處理組和G1（12 h）處理組；（3）空白對(duì)照組、GPER1特異性拮抗劑（G15）處理組、Cd+G15處理組、E2處理組和E2+G15處理組；（4）空白對(duì)照組、Cd處理組、Cd+scramble s

3、iRNA處理組和Cd+GPER1-siRNA處理組；Western blot檢測(cè)（1）、（3）及（4）中各組p-ERK和t-ERK及p-AKT和t-AKT水平；Western blot檢測(cè)（2）、（3）及（4）中各組細(xì)胞核NF-κB(p65)的水平及細(xì)胞中Cyclin A和 Cyclin D1的表達(dá)水平；將WRO和FRO細(xì)胞分為7組進(jìn)行處理：空白對(duì)照組、Cd處理組、Cd+G15處理組、Cd+ERK抑制劑（PD98059）處理組、Cd+A

4、KT抑制劑（LY294002）處理組、Cd+NF-κB抑制劑（PDTC）處理組和Cd+GPER1-siRNA處理組，MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖。
　　結(jié)果：WRO和FRO均為GPER1陽(yáng)性細(xì)胞；低濃度Cd促進(jìn)WRO和FRO細(xì)胞增殖（P＜0.05），500 nM Cd效果最明顯；隨著Cd處理時(shí)間延長(zhǎng)，ERK和AKT蛋白磷酸化水平升高（P＜0.05），15 min時(shí)最高；隨著Cd處理時(shí)間延長(zhǎng)，胞核中NF-κB(p65)水平及細(xì)胞中Cycli

5、n A和Cyclin D1的表達(dá)上升（P＜0.05）；G15或GPER1-siRNA抑制Cd或E2誘導(dǎo)的ERK和AKT磷酸化水平升高（P＜0.05），抑制Cd或E2誘導(dǎo)的胞核中NF-κB(p65)水平升高及細(xì)胞中Cyclin A和 Cyclin D1的表達(dá)上升（P＜0.05）；G15、LY294002、PD98059、PDTC及GPER1-siRNA減弱Cd誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖（P＜0.05）。
　　結(jié)論：鎘通過 GPER1-ERK/A