EDAG-1在人甲狀腺腫瘤中的表達及其對甲狀腺癌細胞增殖和侵襲的影響.pdf

1、胚胎發(fā)育相關(guān)基因-1(embryonic develop-associated gene1,EDAG-1)是實驗室自行分離克隆的一種特異表達于造血組織和細胞的新基因。EDAG-1可通過激活NF-κB信號途徑來調(diào)控血細胞包括血液腫瘤細胞的生物學(xué)行為。前期的研究發(fā)現(xiàn):EDAG-1在胎肝、胎盤、骨髓中高表達,但在正常人的腦、心、腎、肝、肺、肌肉、扁桃體、成熟白細胞等多種組織中表達量極低或不表達;在正常外周血中不表達,而在多種白血病組織中高表達

2、;EDAG-1在多種實體腫瘤組織中不表達,但發(fā)現(xiàn)該基因在甲狀腺癌組織中高表達。但其在甲狀腺癌組織中高表達的意義不清。本實驗主要研究 EDAG-1在甲狀腺癌中的生物學(xué)功能。
　　首先應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)從白血病細胞株YAC-1中擴增到EDAG-1基因片段,構(gòu)建重組真核表達載體pcDNA3.1(+)-EDAG-1。鑒定證實pcDNA3.1(+)-EDAG-1真核表達載體構(gòu)建成功。將重組真核表達載體和空載體分別轉(zhuǎn)

3、染到NIH3T3細胞和Ba/F3細胞中,應(yīng)用軟瓊脂集落實驗檢測NIH3T3細胞轉(zhuǎn)染前后的集落形成能力,以及細胞周期檢測Ba/F3細胞不依賴IL-3抗凋亡能力及其發(fā)生的機制。結(jié)果顯示過表達EDAG-1的NIH3T3細胞集落形成能力明顯增高,而對照組不能形成集落。轉(zhuǎn)染后Ba/F3細胞的不依賴IL-3抗凋亡能力明顯提高。且在Ba/F3-EDAG細胞中,NF-κB的DNA結(jié)合活性明顯高于對照細胞,而STAT3與STAT5的磷酸化未發(fā)生明顯的變化

4、。
　　為了明確EDAG-1在甲狀腺組織的表達的情況,運用Western blot和SP法檢測手術(shù)切除臨床確診的甲狀腺腫瘤和胃癌標本中EDAG-1蛋白的表達情況。結(jié)果顯示EDAG-1在甲狀腺癌、甲狀腺瘤組織和SW579細胞中表達,而在良性甲狀腺腫和胃癌中低表達或不表達。為進一步了解EDAG-1在甲狀腺癌發(fā)生、發(fā)展中所起的作用。同時構(gòu)建了EDAG-1反向真核表達載體構(gòu)建,利用脂質(zhì)體法將pcDNA3.1(+)-EDAG-1質(zhì)粒、pcD

5、NA3.1(+)質(zhì)粒和pcDNA3.1(+)-AS-EDAG-1質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染人甲狀腺癌細胞株SW579,應(yīng)用體外增殖實驗、軟瓊脂集落實驗、劃痕實驗、粘附實驗分別檢測 EDAG-l對甲狀腺癌細胞SW579的增殖力、運動力、粘附力影響。結(jié)果表明過表達EDAG-1可以明顯增強細胞增殖力、運動和粘附能力。將EDAG-1基因特異性siRNA及隨機片段轉(zhuǎn)染進人甲狀腺癌SW579細胞中,沉默SW579細胞中EDAG-1的表達。檢測沉默、過表達以及空載