PRMT2高表達對人甲狀腺癌TPC-1細胞增殖的影響及機制研究.pdf

1、目的：探討蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶2（protein arginine methyltransferase2，PRMT2)高表達對甲狀腺癌TPC-1細胞增殖的影響，并初步探討其調(diào)控細胞周期蛋白D1（Cyclin D1，CCND1）的分子機制。
　　方法：將已構(gòu)建好的PRMT2慢病毒載體轉(zhuǎn)染TPC-1細胞，構(gòu)建TPC-1-PRMT2穩(wěn)定細胞株，采用蛋白免疫印跡（Western Blot）鑒定甲狀腺癌 TPC-1-PRMT2穩(wěn)定細胞株；設

2、立實驗組即四環(huán)素誘導組(+Dox)，陰性對照組即未加四環(huán)素誘導組（-Dox）。以上述兩組細胞為實驗對象，分別采用MTT檢測方法、克隆形成實驗檢測各組細胞的增殖及克隆形成能力；Western Blot檢測甲狀腺癌中高表達PRMT2后對p-Akt、p-GSK-3β、CCND1蛋白表達的影響，并對其影響甲狀腺癌細胞增殖的分子機制進行初步探討。免疫共沉淀實驗判斷在普通甲狀腺癌TPC-1細胞中，PRMT2與TRβ的相互作用。
　　結(jié)果：1.

3、轉(zhuǎn)染TPC-1細胞后獲得TPC-1-PRMT2穩(wěn)定細胞株，經(jīng)四環(huán)素誘導后Western Blot檢測到PRMT2-3Flag蛋白的表達；
　　2. MTT檢測及克隆形成實驗表明，PRMT2高表達后可降低TPC-1細胞的增殖能力；
　　3. Western Blot檢測提示，PRMT2高表達后p-Akt、p-GSK-3β、CCND1的表達均減少。而p-ERK蛋白的表達未見明顯減少。且不影響TRβ的表達。
　　4.免疫共沉