S100A13基因高表達(dá)對(duì)甲狀腺癌TT細(xì)胞生長(zhǎng)特性的影響.pdf

1、目的：建立穩(wěn)定高表達(dá)S100A13基因的甲狀腺癌TT細(xì)胞系，觀察轉(zhuǎn)染S100A13基因后甲狀腺癌TT細(xì)胞的生長(zhǎng)情況，研究S100A13基因高表達(dá)對(duì)甲狀腺癌TT細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的影響，探討S100A13基因在甲狀腺癌發(fā)生中的作用。
　　方法：應(yīng)用Lipofectamine2000將真核表達(dá)載體pcDNA3.2/V5/GW/D-S100A13和空載體pcDNA3.2/V5/GW/D導(dǎo)入甲狀腺癌TT細(xì)胞系，經(jīng)G418抗性篩選得到穩(wěn)定的克隆并

2、擴(kuò)大培養(yǎng)成系。采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR和Western Blotting鑒定表達(dá)S100A13的TT細(xì)胞系，觀察轉(zhuǎn)染后TT細(xì)胞的生長(zhǎng)情況并以相差顯微鏡照相，應(yīng)用細(xì)胞生長(zhǎng)曲線法、MTT比色法、流式細(xì)胞術(shù)研究高表達(dá)S100A13基因?qū)T細(xì)胞生長(zhǎng)速率和細(xì)胞周期的影響。
　　結(jié)果：成功建立了穩(wěn)定高表達(dá)S100A13基因的甲狀腺癌TT細(xì)胞系；轉(zhuǎn)染后TT-V5-S100A13組細(xì)胞生長(zhǎng)明顯增快；分別將1×104個(gè)TT-V5-S100A1

3、3、TT-V5和TT細(xì)胞培養(yǎng)7天后，各組細(xì)胞數(shù)目分別為（2.01±0.05）×105、（0.89±0.04）×105和（0.81±0.03）×105(P<0.001)；MTT比色法示TT-V5-S100A13、TT-V5和TT細(xì)胞培養(yǎng)9天后相對(duì)增殖率分別為（92.11±0.51）％、（44.09±0.75）%、（45.01±0.65）%(P<0.001)。TT-V5-S100A13、TT-V5和TT經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)S期的細(xì)胞比例分別為9

4、.12±0.32%、6.22±0.12%和6.18±0.13%(P<0.001),G2/M期的細(xì)胞比例分別為26.95±0.58%、11.33±0.39%和12.01±0.26%(P<0.001)。
　　結(jié)論：成功建立了帶V5小片段的pcDNA3.2載體的穩(wěn)定高表達(dá)S100A13基因的TT細(xì)胞系TT-V5-S100A13；穩(wěn)定高表達(dá)S100A13基因?qū)T細(xì)胞的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用,能夠促進(jìn)TT細(xì)胞周期從G0/G1期向S期及G2/M期過(guò)