靶向干擾PRMT2基因?qū)谞钕侔㏕PC-1細(xì)胞中CCND1的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究靶向干擾PRMT2基因?qū)谞钕侔㏕PC-1細(xì)胞中CCND1的影響，并對其作用機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　方法：應(yīng)用Lipofectamine2000將構(gòu)建的2條PRMT2-miRNA質(zhì)粒（PRMT2-miRNA1和PRMT2-miRNA2）瞬時(shí)轉(zhuǎn)染TPC-1細(xì)胞，采用Western Blot技術(shù)，從蛋白水平檢測TPC-1細(xì)胞中PRMT2基因表達(dá)下調(diào)后細(xì)胞p-Akt、p-GSK-3β、CCND1的表達(dá)水平。利用雙熒光素酶報(bào)告系

2、統(tǒng)，將CCND1基因的啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒與PRMT2-miRNA質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染TPC-1細(xì)胞，檢測PRMT2對CCND1啟動(dòng)子活性的影響。
　　結(jié)果：
　　1.低表達(dá)細(xì)胞系（PRMT2-miRNA1、PRMT2-miRNA2）和對照組（LacZ-miRNA）相比，低表達(dá)細(xì)胞系的p-Akt、p-GSK-3β、CCND1蛋白水平均增高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　2.在低表達(dá)細(xì)胞系（PRMT2-miRNA1）中，加

3、入 Akt的抑制劑 Wortmannin、LY294002后與未加入抑制劑相比，p-Akt、p-GSK-3β、CCND1蛋白水平均下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3.將CCND1啟動(dòng)子的熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒與PRMT2-miRNA質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染TPC-1細(xì)胞時(shí)，發(fā)現(xiàn)PRMT2能調(diào)節(jié)CCND1啟動(dòng)子活性，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.在甲狀腺癌TPC-1細(xì)胞中，靶向干擾PRMT2基因可促進(jìn)CCND