細胞周期調(diào)控基因表達在甲狀腺腫瘤發(fā)生中的作用.pdf

1、本研究采用流式細胞術(shù)(FCM)和免疫熒光技術(shù)對甲狀腺癌、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和甲狀腺腺瘤的DNA含量(DI值)、細胞增殖活性(PI值)及CyclinD1、CDK4、Rb、p27、bcl-2、PCNA基因蛋白表達進行定量檢測，旨在探討DNA含量、細胞增殖活性及CyclinD1CDK4、Rb、p27、bcl-2、PCNA基因表達在不同甲狀腺腫瘤發(fā)生發(fā)展中的變化，從而為臨床上甲狀腺腫瘤的鑒別診斷、治療提供理論指導。 研究方法：本試驗標本取自

2、河北醫(yī)科大學附屬四院及唐山工人醫(yī)院病理科1999至2004年手術(shù)切除標本的石蠟包埋組織塊，其中甲狀腺癌40例，甲狀腺腺瘤16例，結(jié)節(jié)性甲狀腺腫21例，正常甲狀腺組織10例為對照。 1.將組織制成單細胞懸液，用碘化丙錠(PI)和RNA酶對細胞DNA進行熒光染色后，測定其DNA含量，以DNA指數(shù)(DI值)表示含量，以增殖指數(shù)(PI值)表示細胞增殖活性。 2.分別用CyclinD1、CDK4、Rb、P27、bcl-2、PCNA

3、的單克隆抗體對所測組織進行細胞免疫熒光染色，采用流式細胞術(shù)檢測細胞的CyclinD1、CDK4、Rb、P27、bcl-2、PCNA基因的蛋白表達，以熒光指數(shù)(FI)作為定量表達指標。 研究結(jié)果： 1.甲狀腺癌的DI值明顯高于結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、甲狀腺腺瘤和正常甲狀腺組織(P＜0.01)。結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、甲狀腺腺瘤和正常甲狀腺組織的DI值差異無顯著性(P＞0.05)；甲狀腺癌的異倍體細胞明顯增多，異倍體率為80.0％，與結(jié)節(jié)性

4、甲狀腺腫、甲狀腺腺瘤和正常甲狀腺組織的差異有顯著性(P＜0.01)。甲狀腺癌的PI值明顯高于結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、甲狀腺腺瘤和正常甲狀腺組織(P＜0.01)，結(jié)節(jié)性甲狀腺腫和甲狀腺腺瘤的PI值差異無顯著性(P＞0.05)。 2.甲狀腺腫瘤CyclinD1表達量均高于正常甲狀腺組織，甲狀腺癌的FI值顯著高于結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、甲狀腺腺瘤、正常甲狀腺組織(P＜0.01)，而結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、甲狀腺腺瘤、正常甲狀腺組織之間的FI值差異無顯著性(P

5、＞0.05)。Rb基因在正常甲狀腺組織、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、甲狀腺腺瘤和甲狀腺癌中表達量(FI值)分別依次減少，但差異無顯著性(P＞0.05)。 3.CDK4基因蛋白表達隨細胞異型性的增高而不斷增高，正常細胞組與甲狀腺癌組差異具有顯著性(P＜0.01)。P27基因蛋白表達在正常甲狀腺組織、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、甲狀腺腺瘤和甲狀腺癌中表達的FI值分別依次減少，隨細胞異型性的增高而逐漸減少(見表-4)，在癌細胞組減少最明顯，甲狀腺癌、甲狀腺腺

6、瘤和結(jié)節(jié)性甲狀腺腫FI值均明顯低于正常甲狀腺組織(P＜0.01)，前三者間FI值差異無顯著性(P＞0.05)。 4.bcl-2基因蛋白表達在正常甲狀腺組織、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、甲狀腺腺瘤和甲狀腺癌中表達的FI值分別依次增加，甲狀腺癌與其他各組間差異具有顯著性(P＜0.01)。PCNA基因蛋白表達在甲狀腺癌中明顯高于正常甲狀腺組織、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、甲狀腺腺瘤。與其他各組間差異具有顯著性(P＜0.01)。 研究結(jié)論： 1

7、.DNA含量和增殖指數(shù)在甲狀腺癌顯著高于正常甲狀腺組織、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、甲狀腺腺瘤，DNA含量和增殖指數(shù)可作為鑒別腫瘤良惡性的標志物。 2.CyclinD1、PCNA在甲狀腺癌中的表達顯著高于正常甲狀腺組織、結(jié)節(jié)性甲狀腺腫、甲狀腺腺瘤，說明CyclinD1、PCNA可能通過加快細胞增殖周期參與了腫瘤的形成。CDK4基因蛋白表達在正常細胞組與甲狀腺癌組差異具有顯著性.說明CDK4高表達與甲狀腺腫瘤發(fā)生密切相關(guān)。 3.P27