探討癌基因Aurora-A在腫瘤發(fā)生中作用機(jī)制的研究.pdf

1、中心體是一種重要的細(xì)胞器。中心體由一對中心粒(centriole)、中心粒之間的連接物質(zhì)(the connection between centtrioles)以及中心粒周圍物質(zhì)(pericentriolar material，PCM)三部分組成。它的主要功能是作為細(xì)胞微管組織中心，在細(xì)胞有絲分裂期建立起紡錘體的兩極來確保復(fù)制的染色體忠實(shí)地精確地平均分配到兩個(gè)子細(xì)胞中，從而維持基因組的穩(wěn)定性。絲/蘇氨酸蛋白激酶Aurora-A在細(xì)胞有絲

2、分裂期從的S期早期到G2/M期定位在中心體的PCM區(qū)域，并參與調(diào)節(jié)中心體和微管的功能，確保染色體的忠實(shí)分離及胞質(zhì)分裂的順利完成<'5,122>。 Aurora-A基因定位在染色體20q13.2區(qū)域，該區(qū)域在多種腫瘤中擴(kuò)增<'123-126>。在胃癌、膀胱癌、前列腺癌、結(jié)直腸癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤和肝癌中,均檢測到Aurora-A基因在DNA水平擴(kuò)增或者在蛋白、mRNA水平高表達(dá)<'28-35>。外源高表達(dá)的Aurora-A可以轉(zhuǎn)化NIH

3、3T3和Ratl細(xì)胞，表達(dá)組成性活化Aurora-A的NIH3T3細(xì)胞和表達(dá)野生型Aurora-A的Ratl細(xì)胞都可以在裸鼠體內(nèi)形成腫瘤<'26,28>。最近有研究表明：Aurora-A可增加轉(zhuǎn)基因小鼠的乳腺癌發(fā)生率<'127>。因此，Aurora-A可認(rèn)為是一個(gè)癌基因(oncogene)。 在中國，食管癌是死亡率排名第四的常見惡性腫瘤。但是，其確切發(fā)病機(jī)理仍然不清楚，有待于進(jìn)一步研究。染色體20q的擴(kuò)增在食管癌中十分常見<'1

4、28-132>，已有研究表明Aurora-A在食管癌中表達(dá)升高<'39-40>，盡管Aurora-A基因定位在染色體20q13.2區(qū)域，然而，迄今未見檢測食管癌組織中Aurora-A DNA的拷貝數(shù)的研究報(bào)道。為了探討Aurora-A在食管癌中的可能作用，本研究首先在食管癌標(biāo)本中檢測了Aurora-A的DNA以及蛋白、mRNA的狀態(tài)，結(jié)果顯示Aurora-A不僅在蛋白、mRNA水平高表達(dá)，同時(shí)在DNA水平表現(xiàn)出基因擴(kuò)增。 為了更

5、好地研究Aurora-A在腫瘤發(fā)生中的作用，本研究構(gòu)建了Aurora-A的四環(huán)素誘導(dǎo)表達(dá)細(xì)胞系，293-TR-Aur-myc。經(jīng)誘導(dǎo)高表達(dá)的Aurora-A能夠促進(jìn)細(xì)胞生長以及平板克隆形成能力，并且，高表達(dá)Aurora-A的細(xì)胞可形成轉(zhuǎn)化灶和在軟瓊脂中形成集落。過表達(dá)Aurora-A顯著增加細(xì)胞染色體水平的不穩(wěn)定性。在一定時(shí)間內(nèi)，隨著Aurora-A誘導(dǎo)表達(dá)時(shí)間的延長，中心體數(shù)目發(fā)生異常增多的細(xì)胞數(shù)也隨之增加；染色體計(jì)數(shù)方法顯示Auro