鈣激活氯通道ANO1-TMEM16A在腫瘤發(fā)生、發(fā)展和痛覺調(diào)制中的作用機制研究.pdf

1、一:研究表明,細胞膜表面離子通道異常表達以及胞內(nèi) Ca2+內(nèi)穩(wěn)態(tài)失衡可影響細胞遷移和凋亡。鈣激活氯通道廣泛表達于上皮細胞并參與細胞分泌以及容量性調(diào)節(jié),從而維持細胞在遷移、分化以及凋亡等生理過程中的離子平衡。近期發(fā)現(xiàn)的鈣激活氯通道 ANO1/TMEM16A定位于人染色體11q13區(qū)域,已有報道表明ANO1基因定位于人類染色體11q13被稱為“Amplicon core”的區(qū)域,此區(qū)域很多基因在上皮類癌癥如乳腺癌、肺癌和口腔上皮癌中高表達且

2、在癌癥發(fā)生發(fā)展過程中均發(fā)揮重要作用,因此提示 ANO1在上皮類腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。本研究探討了鈣激活氯通道ANO1在前列腺癌發(fā)生和發(fā)展過程中的作用。
　　本研究首先證實,相對于人正常前列腺上皮細胞系RWPE-1,ANO1mRNA及蛋白水平在人前列腺癌細胞系LNCaP和PC-3中表達明顯增高;全細胞膜片鉗實驗結(jié)果證實在此兩種前列腺癌細胞系中,ANO1通道電流明顯增大。免疫組化實驗證實 ANO1在人前列腺癌組織中高表達而在前

3、列腺增生和癌旁組織中低表達或無表達,并且隨著TNM臨床分期及Gleason評分的增高ANO1表達增加。通過設(shè)計三段針對ANO1 N端的shRNA,應(yīng)用CCK8、克隆形成、劃痕以及Transwell小室等實驗手段進一步證實, ANO1沉默可以明顯抑制PC-3前列腺癌細胞系的增值、遷移以及侵襲等能力。此外,裸鼠體內(nèi)成瘤實驗證實將 PC-3細胞系誘導的裸鼠瘤體內(nèi)ANO1沉默后可明顯抑制腫瘤的生長。本學位論文的第一部分得出如下結(jié)論:
　　

4、1.鈣激活氯通道ANO1mRNA和蛋白水平在人前列腺癌細胞系LNCaP和PC-3中表達明顯高于人正常前列腺上皮細胞系RWPE-1;
　　2.鈣激活氯通道 ANO1在人前列腺癌組織中高表達,而在前列腺增生和前列腺癌癌旁組織中無表達或低表達,并且隨著前列腺癌增加而 ANO1表達水平上升;
　　3.抑制鈣激活氯通道ANO1的表達可抑制PC-3前列腺癌細胞系體外增值、遷移、侵襲效率以及裸鼠體內(nèi)腫瘤生長能力;
　　4.膜蛋白 A

5、NO1也許可作為前列腺癌治療和治療過程中恢復(fù)的潛在靶點和生物標志物。
　　摘要二:鈣激活氯通道ANO1/TMEM16A廣泛表達于小DRG神經(jīng)元中,而小DRG神經(jīng)元主要參與傷害性感受調(diào)節(jié),提示ANO1在痛覺傳導過程中的作用。為探究鈣激活氯通道ANO1在傷害性感受調(diào)節(jié)中的作用,本研究首先記錄了ANO1對于小DRG神經(jīng)元興奮性的影響,過表達ANO1可使小DRG神經(jīng)元細胞去極化并且增加其興奮性。應(yīng)用real-time PCR和wester

6、n手段證實,在CFA誘導的大鼠足底炎癥痛模型中ANO1的mRNA和蛋白表達水平降低,并且隨著炎癥痛的緩解而表達回升至正常水平。此外,大鼠鞘內(nèi)注射ANO1-shRNA敲低DRG神經(jīng)元細胞中的ANO1后可明顯降低大鼠足底熱敏痛閾值,白介素4(IL-4)在CFA誘導的大鼠足底炎癥痛模型中的表達情況呈現(xiàn)出與ANO1相似的趨勢。在原代培養(yǎng)的小DRG神經(jīng)元細胞中用IL-4刺激可使ANO1的mRNA表達水平呈劑量依賴性增加,且大鼠鞘內(nèi)注射IL4-sh

7、RNA后可使DRG神經(jīng)元細胞中的ANO1mRNA表達降低。在IL-4敲除小鼠的DRG神經(jīng)元細胞中ANO1的mRNA和蛋白表達水平也明顯低于正常小鼠,在人支氣管上皮細胞HBSMC中IL-4通過經(jīng)典的STAT6通路調(diào)節(jié)ANO1的表達。本研究證實了鈣激活氯通道ANO1受抗炎因子IL-4調(diào)節(jié)而在慢性炎癥痛過程中起到鎮(zhèn)痛作用,推測此過程構(gòu)成了神經(jīng)-免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)的反饋性保護機制。
　　本學位論文的第二部分得出如下結(jié)論:
　　1.過表達鈣