ERK1-2通路在低氧刺激PASMCs引起的鈣激活氯通道表達(dá)改變中的作用研究.pdf

1、目的:
　　1.探討低氧狀態(tài)下大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(PASMCs)中鈣激活性氯離子通道(CLCA2) mRNA和蛋白表達(dá)的變化。
　　2.探討低氧狀態(tài)下鈣激活性氯離子通道(CLCA2)與ERK1/2信號(hào)通路的關(guān)系。
　　方法:
　　1.解剖SD雄性大鼠，取出肺動(dòng)脈平滑肌，采用酶消化法獲取PASMCs，進(jìn)行細(xì)胞原代培養(yǎng)。
　　2.采用小鼠抗大鼠SMα-actin免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法進(jìn)行細(xì)胞鑒定。
　　3.

2、經(jīng)培養(yǎng)鑒定PASMCs隨機(jī)分為:常氧組（N組，n=6），低氧組（H組，n=6），DMSO對(duì)照+低氧組（D組，n=6），U0126干預(yù)+低氧組（U組，n=6），Staurosporineaglycone干預(yù)+低氧組(SA組，n=6)。
　　4.采用免疫印跡法檢測鈣激活性氯離子通道(CLCA2)蛋白的表達(dá)。
　　5.采用半定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)測定鈣激活性氯離子通道(CLCA2) mRNA水平的表達(dá)。

3、>　　結(jié)果:與常氧組（N組）比較，低氧組（H組）PASMCs中CLCA2 mRNA和蛋白的表達(dá)量均顯著上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）;與DMSO對(duì)照+低氧組(D組)比較，U0126干預(yù)+低氧組（U組）CLCA2 mRNA和蛋白的表達(dá)均明顯上調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01），Staurosporine aglycone干預(yù)+低氧組(SA組)mRNA的表達(dá)顯著下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，蛋白的表達(dá)輕微下調(diào)，差異無