ERK1-2信號通路在賴氨匹林抗乳腺癌中的作用.pdf

1、目的：研究賴氨匹林（Aspisol）對人乳腺癌細(xì)胞 MDA-MB-231、MCF-7增殖、凋亡的調(diào)控作用，及對MDA-MB-231、MCF-7細(xì)胞內(nèi)ERK1/2(extracellular signal-regulated kinase)、p-ERK1/2(p-extracellular signal-regulated kinase)蛋白和凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax表達(dá)的影響，探討Aspisol體外抗乳腺癌作用的機(jī)制。
　　

2、方法：實(shí)驗(yàn)分為對照組、Aspisol（1、5、10 mmol/L）組、PD9805940μmol/L MEK(mitogen-activated protein kinase kinase)抑制劑組、PD9805940μmol/L聯(lián)合Aspisol10 mmol/L組共六組。1、采用免疫細(xì)胞化學(xué)方法測定MDA-MB-231、MCF-7細(xì)胞的環(huán)氧合酶-2（COX-2）的表達(dá)。2、通過HE染色觀察各組藥物作用24h對MDA-MB-231、M

3、CF-7細(xì)胞形態(tài)的影響；3、四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測細(xì)胞生長抑制率；4、流式細(xì)胞儀(flow cytometer， FCM)檢測細(xì)胞凋亡率；5、MDA-MB-231、MCF-7細(xì)胞經(jīng)各組藥物作用于24 h后，蛋白質(zhì)印跡(western blotting)法檢測ERK1/2、p-ERK1/2和凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax的表達(dá)。
　　結(jié)果：1、MCF-7細(xì)胞未檢測到COX-2的表達(dá),而MDA-MB-231細(xì)胞COX-2呈強(qiáng)表

4、達(dá),COX-2表達(dá)于細(xì)胞漿中，免疫細(xì)胞化學(xué)顯色細(xì)胞胞漿呈棕黃色。2、HE染色光鏡下見 Aspisol組細(xì)胞密度減小，細(xì)胞變圓,胞核染色變淺。PD98059聯(lián)合Aspisol組作用效果更明顯。3、MTT結(jié)果顯示1、5、10 mmol/L Aspisol可抑制MDA-MB-231、MCF-7細(xì)胞的生長,藥物濃度越大,時(shí)間越長,抑制作用越明顯,差異有顯著性(P<0.01)。Aspisol10 mmol/L的濃度抑制率最大，在作用于MDA-MB

5、-231細(xì)胞72小時(shí)后抑制率可達(dá)到(80.75±3.14)％，作用于MCF-7細(xì)胞72小時(shí)后抑制率可達(dá)到(69.54±3.26)%，提示MDA-MB-231細(xì)胞對Aspisol的抑制作用較MCF-7細(xì)胞敏感。PD98059與Aspisol合用抑制效果更明顯，合用組與PD98059和Aspisol單獨(dú)組差異有顯著性（P<0.01）。4、Aspisol可誘導(dǎo)MDA-MB-231、MCF-7細(xì)胞發(fā)生凋亡。隨著 Aspisol濃度的提高，凋亡率

6、明顯增高，差異有顯著性(P<0.01)。10 mmol/L Aspisol組細(xì)胞凋亡率最高,其中MDA-MB-231細(xì)胞早期凋亡率達(dá)到（15.41±2.14）%，MCF-7細(xì)胞早期凋亡率為（11.40±3.56）%。PD98059與 Aspisol合用組的凋亡率高于 PD98059組和 Aspisol組，合用組與 PD98059和Aspisol單獨(dú)組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。5、Aspisol對 MDA-MB-231、MCF-7

7、細(xì)胞總ERK表達(dá)影響不明顯(P>0.05),主要抑制ERK磷酸化,即下調(diào)p－ERK表達(dá)，且藥物濃度越大,抑制作用越明顯,差異有顯著性(P<0.05)。合用組的p－ERK明顯低于PD98059組和Aspisol組（P<0.05）。可見Aspisol和PD98059均可降低p-ERK的表達(dá)。6、Aspisol可下調(diào)MDA-MB-231、MCF-7細(xì)胞的Bcl-2蛋白的表達(dá)（P<0.05）,上調(diào)Bax蛋白的表達(dá)（P<0.05），并且藥物濃度越

8、大,作用效果越明顯。PD98059與Aspisol合用效果優(yōu)于單獨(dú)使用，合用組與PD98059和Aspisol單獨(dú)組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、MCF-7細(xì)胞COX-2的表達(dá)為陰性,而MDA-MB-231細(xì)胞COX-2呈強(qiáng)表達(dá)；
　　2、Aspisol可誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231、MCF-7凋亡，抑制其生長和增殖；
　　3、Aspisol可抑制乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231、M