雷公藤紅素在乳腺癌中抑制mTOR信號通路作用機制的研究.pdf

1、乳腺癌作為一種常見的惡性腫瘤，其發(fā)病后的死亡率已位居于女性腫瘤死亡第一位。近年統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，乳腺癌的發(fā)病率和死亡率在世界范圍內(nèi)呈較快增長趨勢，且發(fā)病年齡趨向年輕化，嚴重威脅女性健康。乳腺癌的浸潤和轉(zhuǎn)移是導致患者死亡最重要的原因。由于mTOR信號通路的過度活化與腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及浸潤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，因此在乳腺癌中有關(guān)mTOR靶點的研究成為新的研究熱點。但是，關(guān)于mTOR在乳腺癌的發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中所發(fā)揮作用的具體分子機制還不十分明確，推測此機制可

2、能是通過PI3K/Akt/mTOR通路發(fā)揮作用。雷公藤紅素（Celastrol，Cel），又名南蛇藤素，主要從雷公藤屬植物的根或根的木質(zhì)部中分離得到，是一種具有多種藥效活性的天然化合物。在臨床上常用于治療風濕性關(guān)節(jié)炎、麻風反應以及系統(tǒng)性紅斑狼瘡等多種自身免疫性疾病。雷公藤紅素雖然很早就發(fā)現(xiàn)具有抗炎、抗腫瘤等作用，但有關(guān)其抗腫瘤機制僅在近年來才見部分報道。
　　目的：基于乳腺癌細胞內(nèi) PI3K/Akt/mTOR信號轉(zhuǎn)導通路，探討雷公

3、藤紅素抑制乳腺癌細胞中mTOR信號轉(zhuǎn)導通路的作用及分子機制。
　　方法：雷公藤紅素處理不同乳腺癌細胞后，體外采用 MTT法測定雷公藤紅素對乳腺癌細胞活力的影響；通過Real-time PCR和Western Blot分別從基因水平和蛋白水平檢測雷公藤紅素對乳腺癌細胞中mTOR的影響；放線菌酮示蹤實驗檢測雷公藤紅素對mTOR蛋白穩(wěn)定性的影響；免疫共沉淀研究mTOR、Hsp90和Cdc37間的相互作用，以及檢測雷公藤紅素對mTOR、H

4、sp90和Cdc37復合體的影響；MG-132和氯喹分別處理細胞后，采用Western Blot檢測雷公藤紅素對mTOR蛋白降解方式的影響；Western Blot觀察雷公藤紅素處理不同時間點對細胞內(nèi)p-Akt蛋白表達的影響，通過免疫共沉淀研究雷公藤紅素升高p-Akt的機制；建立BALB/c-nu裸鼠移植瘤模型，體內(nèi)研究雙靶點聯(lián)合對乳腺癌 MDA-MB-231細胞移植瘤的影響；采用免疫組化法檢測腫瘤組織中mTOR、ki67等表達變化。<

5、br>　　結(jié)論：⑴雷公藤紅素可抑制乳腺癌細胞的增殖，且具有時間和劑量依賴性。⑵雷公藤紅素在基因水平和蛋白水平均能下調(diào)mTOR的表達，通過破壞mTOR蛋白的穩(wěn)定性，加速 mTOR經(jīng)泛素-蛋白酶體途徑降解，從而抑制乳腺癌細胞中mTOR信號轉(zhuǎn)導途徑。⑶雷公藤紅素可破壞mTOR、Cdc37和Hsp90復合體的穩(wěn)定性從而抑制乳腺癌細胞生長。⑷雷公藤紅素處理后的乳腺癌細胞，由于應激作用短時間內(nèi) p-Akt表達量會一過性增高，通過促進pPDK1、Cd